鎘致體外培養(yǎng)雞胚腦神經(jīng)元凋亡機理的研究.pdf

1、本試驗以體外培養(yǎng)雞胚腦神經(jīng)元為研究對象，在培養(yǎng)液中加入不同濃度CdCl2，通過對神經(jīng)元活性檢測、形態(tài)學觀察、細胞凋亡、抗氧化功能、DNA損傷、△ψm、細胞內(nèi)游離鈣離子濃度、Caspase-3，9活性及細胞內(nèi)CaM、Caspase-3mRNA表達水平等的檢測，探討了鎘致雞胚腦神經(jīng)元凋亡的機理。研究結果表明： 1.選用7d齡雞胚分離腦神經(jīng)細胞，采用四唑鹽比色法(MTT法)和二硝基苯肼比色法觀察CdCl2對雞胚腦神經(jīng)元活性的影響，結果

2、表明CdCl2對雞胚腦神經(jīng)元具有毒性作用。 2.采用流式細胞術檢測磷脂酰絲氨酸(PS)，AO/EB雙熒光染色、HE染色、透射電鏡觀察鎘致雞胚腦神經(jīng)元形態(tài)學變化、瓊脂糖凝膠電泳、TUNEL法觀察不同濃度CdCl2誘導雞胚腦神經(jīng)元凋亡情況，從不同角度證實CdCl2能夠引發(fā)神經(jīng)元凋亡。 3.通過對細胞內(nèi)抗氧化功能的檢測，結果表明鎘能夠導致神經(jīng)元NOS活性與NO含量升高，ROS含量增高，表明CdCl2能夠破壞機體抗氧化防御系統(tǒng)及

3、清除自由基功能，使雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生氧化損傷，進而誘導其發(fā)生凋亡。 4.應用堿性SCGE檢測鎘對雞胚腦神經(jīng)元DNA的損傷作用，結果證實CdCl2通過引起神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度增加，激活內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶導致DNA在核小體間斷裂途徑誘導神經(jīng)元凋亡。 5.應用流式細胞術檢測△ψm，比色法檢測Caspase-3，Caspase-9活性，熒光探針法檢測雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子濃度，半定量RT-PCR法檢測了神經(jīng)元內(nèi)Caspase-

4、3mRNA、CaMmRNA表達水平。試驗表明CdCl2導致雞胚腦神經(jīng)元游離鈣離子濃度升高，干擾細胞鈣離子的轉運，導致細胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡，使△ψm下降，Caspase-3，9活性上升，進而通過激活線粒體凋亡通路導致神經(jīng)元凋亡。 本試驗從細胞、分子水平上探討鎘致禽類腦神經(jīng)元性作用，揭示了鎘能夠降低神經(jīng)元的活性、誘發(fā)氧化應激、損傷細胞DNA、干擾細胞鈣穩(wěn)態(tài)、影響細胞內(nèi)基因表達、誘導細胞凋亡，闡明了鎘致禽類腦神經(jīng)元毒性機制，為畜禽鎘中毒的防