錳致體外培養(yǎng)雞胚腦神經(jīng)元凋亡機理的研究.pdf

1、錳為一種淺灰色過渡性金屬元素，在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛，如干電池、電焊條、農(nóng)用滅菌劑和化肥的制造與使用。錳也是一種主要的環(huán)境和工業(yè)污染物，過量攝入會對腦、肝、肺等產(chǎn)生不同程度的損害作用，其中神經(jīng)系統(tǒng)是錳毒性作用的主要靶器官。近年來，國內(nèi)外對錳的神經(jīng)毒性機制進行了大量的研究，但主要集中在人和鼠，而對禽類的研究很少。本試驗以原代培養(yǎng)的雞胚腦神經(jīng)元為研究對象，在含終濃度為0、1.5、2、2.5 mmol/L MnCl2的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24

2、 h，應(yīng)用流式細胞儀、原位末端標(biāo)記、DNA電泳分析、熒光染色、電子顯微鏡、實時定量PCR染料法等方法，從細胞形態(tài)學(xué)變化、DNA斷裂變化、氧化應(yīng)激、細胞內(nèi)游離Ca2+濃度、線粒體膜電位及CaM mRNA表達水平等方面，研究MnCl2誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化、生物學(xué)改變及可能的調(diào)控環(huán)節(jié)，初步探討錳誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元凋亡的機制。研究結(jié)果表明：
　　 1.應(yīng)用尼氏體染色、AO/EB雙熒光染色、透射電鏡、DNA Ladder、TU

3、NEL法、流式細胞儀觀察不同濃度的MnCl2對雞胚腦神經(jīng)元的影響，結(jié)果表明MnCl2能誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生凋亡，且凋亡具有劑量依賴性。
　　 2.錳能夠誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生氧化應(yīng)激，導(dǎo)致GSH含量降低，ROS生成增加，破壞機體的抗氧化系統(tǒng)及清除自由基的功能，造成雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生氧化損傷，這可能是錳誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)細胞凋亡的機制之一。
　　 3.錳能夠使雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性和△ψm降低，導(dǎo)致

4、線粒體損傷和能量代謝障礙，證實MnCl2可能通過線粒體途徑誘導(dǎo)細胞凋亡。
　　 4.錳中毒可使雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)[Ca2+]i升高，CaM基因mRNA表達量降低，鈣穩(wěn)態(tài)發(fā)生紊亂，提示鈣穩(wěn)態(tài)失衡在錳致雞胚腦神經(jīng)細胞凋亡中起一定作用。
　　 5.錳中毒可使雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)α-syn基因mRNA表達量增加，提示錳的神經(jīng)毒性可導(dǎo)致α-syn發(fā)生變化。
　　 綜上所述，錳中毒可導(dǎo)致雞胚腦神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合物