日本沼蝦生精細(xì)胞體外增殖與分化的研究.pdf

1、精子體外發(fā)生的研究是生殖生物學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。目前，在哺乳類、兩棲類和魚類方面，通過人為激素調(diào)控，精子體外發(fā)生的研究基本上都實(shí)現(xiàn)了精原細(xì)胞的增殖分化，精母細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂形成精子細(xì)胞的過程。但是精子細(xì)胞的完全成熟尚未實(shí)現(xiàn)。通過單精子細(xì)胞向卵細(xì)胞的注射以完成受精，可以形成正常的胚胎，并能夠產(chǎn)生健康的幼體，盡管成功率仍然較低。甲殼類動(dòng)物精子發(fā)生的體外研究目前報(bào)道較少。
　　 甲殼類細(xì)胞培養(yǎng)主要是在研究蝦類病害病理中發(fā)展起來的，雖然

2、目前蝦類細(xì)胞培養(yǎng)可以滿足病毒學(xué)和一些生理學(xué)研究的基本要求，但是仍然未能像昆蟲類成功地建立起永生細(xì)胞系，表現(xiàn)出一定的特殊性。甲殼動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)研究中報(bào)道較多的是對(duì)卵巢和血淋巴的培養(yǎng)，而對(duì)增殖能力很強(qiáng)的精巢的培養(yǎng)報(bào)道較少，因此研究蝦類精子體外發(fā)生，也可以嘗試建立蝦類永生細(xì)胞系。
　　 論文以日本沼蝦的精巢生精細(xì)胞為培養(yǎng)對(duì)象，研究了日本沼蝦生精細(xì)胞體外培養(yǎng)所需的基本條件，觀察描述了生精細(xì)胞增殖和分化的基本情況，并初步地研究了前腦粗提液對(duì)

3、精原細(xì)胞增殖分化的影響。結(jié)果如下：
　　 （1）通過測(cè)定細(xì)胞在接種24h后的貼壁率，以及兩周內(nèi)的細(xì)胞存活率，發(fā)現(xiàn)日本沼蝦生精細(xì)胞體外培養(yǎng)的最適滲透壓為400 mmol/L，最適pH為7.2～7.4。培養(yǎng)基中添加10％～20％胎牛血清能促進(jìn)生精細(xì)胞的貼壁和存活，不添加胎牛血清細(xì)胞貼壁率會(huì)下降，濃度太高也會(huì)使細(xì)胞存活率下降。
　　 （2）利用細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)方法進(jìn)行形態(tài)觀察和定位跟蹤，同時(shí)結(jié)合堿性磷酸酶染色的輔助鑒定，描述

4、了各生精細(xì)胞特點(diǎn)，以及體外增殖和分化情況：①以精巢發(fā)育早期的冬季蝦為材料，通過單位重力沉降和差速貼壁分離細(xì)胞，可以獲得約56％的精原細(xì)胞。精原細(xì)胞至少分為兩種，一種較小約6～8μm，另一種較大，10～12μm。②單個(gè)精原細(xì)胞只能存活3～7d左右，且分裂能力較弱。組織培養(yǎng)中的精原細(xì)胞則具有很強(qiáng)的存活和分裂能力，但分裂活動(dòng)不超過1周。③少數(shù)初級(jí)精母細(xì)胞可以在體外進(jìn)行減數(shù)分裂形成一個(gè)精子細(xì)胞的四分體。分裂過程細(xì)胞膜并不完全分開，而是形成合胞體

5、。多數(shù)精母細(xì)胞不能分裂。④日本沼蝦精原細(xì)胞和精母細(xì)胞接種后仍然為圓形，并以克隆形式分裂生長(zhǎng)，子代細(xì)胞彼此不分開，形成一個(gè)團(tuán)聚體。⑤處于早期的精子細(xì)胞在體外可以完成部分的分化。早期精子細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生絲狀物，細(xì)胞形狀由圓形逐漸變?yōu)闄E圓形。隨后，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明亮的頂體囊泡，囊泡逐漸變大，將細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核擠向另一側(cè)。少數(shù)精子細(xì)胞可見棘突的產(chǎn)生。⑥精巢體細(xì)胞接種后表現(xiàn)為兩種形態(tài)，一種呈上皮樣，另一種呈成纖維樣：部分細(xì)胞有分裂現(xiàn)象，但分裂緩慢，且存活時(shí)間不