水稻甲基結(jié)合蛋白MBD701的克隆、植物表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、DNA甲基化在基因表達(dá)、植物細(xì)胞分化以及系統(tǒng)發(fā)育中起著重要的調(diào)控作用，MBD是與DNA甲基化結(jié)合的重要反式作用因子，在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控功能。本論文利用RT-PCR方法克隆了水稻中編碼甲基結(jié)合蛋白基因MBD701，構(gòu)建了分別由35S和PGR驅(qū)動(dòng)RNAi抑制表達(dá)載體，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)其進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了初步鑒定的轉(zhuǎn)基因植株。主要結(jié)論如下：
　　 1.利用RT-PCR方法克隆了水稻甲基結(jié)合蛋白基因MBD70

2、1的cDNA片段，序列分析顯示：獲得的cDNA片段大小為1353bp，其中5’-非編碼區(qū)有19bp，3’-非編碼區(qū)有389 bp，編碼區(qū)為945bp，該基因編碼的蛋白包含315個(gè)氨基酸，推測(cè)編碼蛋白的分子量為35.2 kD。
　　 2.聚類分析顯示，MBD701與玉米的MBD108、MBD111、擬南芥AtMBD2、AtMBD12以及小麥TaMBD2的同源性最高，同屬于MBD的第Ⅲ亞類，對(duì)MBD701基因推測(cè)的氨基酸序列的Int

3、erPro分析發(fā)現(xiàn)，MBD701包含典型的甲基結(jié)合蛋白保守域(138～212位氨基酸)和1個(gè)CW型的鋅指結(jié)構(gòu)域(73～132位氨基酸)。
　　 3.分別構(gòu)建了.35S和PGR驅(qū)動(dòng)的MBD701的RNAi抑制表達(dá)載體，以粳稻為受體材料，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將構(gòu)建好的RNAi載體進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化。對(duì)部分遺傳轉(zhuǎn)化獲得的水稻植株進(jìn)行了PCR初步檢測(cè)，結(jié)果表明：有檢測(cè)到預(yù)期基因片段整合在水稻基因組中，獲得陽(yáng)性植株共58株，為下一步探討MBD的生