SUSIBA2正反義表達載體的構(gòu)建及其對水稻的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、淀粉是高等植物中碳水化合物的主要貯藏形式，也是糧食作物產(chǎn)品的最主要成分。在植物中，與淀粉生物合成直接相關(guān)的酶有：1，6-二磷酸腺苷葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose Gyrophosphorylase，AGPase)、可溶性淀粉合成酶(solublestarch synthase，SSS)、顆粒性淀粉合成酶酶(granule-bound starch synthase，GBSS)、淀粉分支酶(Starch branching en

2、zyme，SBE)、淀粉去分支酶(debranching enzyme，DBE)。 近年來的研究表明：許多淀粉合成酶基因的表達是受到糖信號的誘導(dǎo)。本研究的SUSIBA2(sugar signaling in barley)基因是瑞典農(nóng)業(yè)大學(xué)Christer教授實驗室從大麥中分離出來的，它是結(jié)合在異淀粉酶與淀粉分支酶啟動子的糖應(yīng)答元件上作為激活因子，在大麥胚乳淀粉累積過程中起重要的調(diào)控作用。本研究通過構(gòu)建SUSIBA2基因的正義及

3、反義表達載體，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將其基因?qū)胨救毡厩绲幕蚪M中，獲得轉(zhuǎn)基因水稻植株。以期該基因在水稻中發(fā)揮調(diào)節(jié)有關(guān)淀粉酶活性的作用，最終使其淀粉組成發(fā)生變化。主要研究結(jié)果如下： 1、用BgⅢ單酶雙切從pS1473的載體上切下目的基因SUSIBA2，用BamHI單酶切開pTCK303載體，將目的基因連接到載體上，成功地構(gòu)建了SUSIBA2基因的正義及反義表達載體pTCK303-SUSIBA2(+)和pTCK303-SUSIBA

4、2(-)。 2、利用凍融法將構(gòu)建好的植物表達載體pTCK303-SLISIBA2(+)和pTCK303-SUSIBA2(-)成功導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404中，得到既抗Rif(利福平霉素)，又抗Kan(卡那霉素)的農(nóng)桿菌菌落。 3、通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將SUJSIBA2基因?qū)胨净蚪M中，共獲得了6株抗性植株，其中4株為正義表達植株，2株為反義表達植株。 4、PCR結(jié)果表明，4株正義表達植株全部為陽性植株，而2株