應(yīng)用cDNa-AFLP技術(shù)分析銅脅迫下水稻根系基因差異表達(dá).pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展，重金屬污染已經(jīng)成為日益嚴(yán)重的社會(huì)問題。許多重金屬是植物生理過程必需的微量元素，如鋅、銅是許多酶的組成成分，但這些必需金屬和非必需金屬一旦超過最適濃度，就會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生很強(qiáng)的毒害作用。植物在適應(yīng)環(huán)境的過程中逐漸形成了一系列對(duì)重金屬的耐性機(jī)制，如螯合、區(qū)室化和排斥等。水稻（OryzasativeL.）是世界上許多國(guó)家的糧食作物，也是單子葉模式植物。本論文以本實(shí)驗(yàn)室篩選和鑒定的耐銅水稻品種B1139和敏銅水稻品種B1195為

2、試驗(yàn)材料，采用水培方式，運(yùn)用利用cDNA-AFLP（cDNA擴(kuò)增長(zhǎng)度片段多態(tài)性）方法，研究了銅脅迫對(duì)水稻幼苗根系基因表達(dá)的差異，為進(jìn)一步闡明植物的重金屬耐性機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　cDNA-AFLP是一種常用的基因差異表達(dá)分析技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)利用限制性內(nèi)切酶AseI和TaqI對(duì)水稻根系cDNA進(jìn)行雙酶切后，連接多核苷酸接頭，利用有兩個(gè)選擇性堿基的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示，在所用電泳條件及PCR反應(yīng)體系相同的情況下，不同的引物組合有

3、不同的電泳圖譜，同一引物組合可以得到相同的條帶。而且在克隆得到的DNA片段序列中含有特定的接頭和選擇性堿基序列（選擇性引物序列），表明cDNA-AFLP方法具有較高的可靠性和重復(fù)性。
　　本研究選用8個(gè)A-NN和4個(gè)T-N引物，共32對(duì)引物組合進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，每個(gè)引物組合擴(kuò)增的條帶數(shù)可達(dá)20條以上，條帶清晰，共擴(kuò)增得到大約700條條帶，獲得的22個(gè)差異性片段，測(cè)序后在GenBank核酸數(shù)據(jù)庫中利用BLAST進(jìn)行同源搜索，可大致將其