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1、本實(shí)驗(yàn)對(duì)粗茶皂甙進(jìn)行分離提純,并且研究測(cè)定皂甙含量的最佳方法,再以提取茶皂甙和純品茶皂甙為試驗(yàn)材料,研究其對(duì)甲烷產(chǎn)量和瘤胃發(fā)酵的影響;利用熒光定量PCR 技術(shù)分析檢測(cè)瘤胃微生態(tài)主要菌群的變化,并進(jìn)一步研究茶皂甙的毒性機(jī)理。
試驗(yàn)一對(duì)粗茶皂甙(CTS)進(jìn)行了分離提純,并研究了測(cè)定皂甙的最佳方法,經(jīng)測(cè)定粗茶皂甙的皂甙含量為40%,多糖含量為16%,正丁醇提取茶皂甙(BTS)的皂甙含量為70%,非皂甙活性物質(zhì)(OBC)的多糖含量
2、為80%。
試驗(yàn)二以分離得到的茶皂甙和純品茶皂甙為試驗(yàn)材料,研究其對(duì)甲烷產(chǎn)量和瘤胃發(fā)酵的影響,并且利用熒光定量PCR 技術(shù)分析檢測(cè)瘤胃微生態(tài)主要菌群的變化,本部分分為兩個(gè)試驗(yàn),試驗(yàn)1 添加0,1.71,3.43和8.68 mg/200 mg 底物的BTS,添加0.6,1.2和2.4 mg/200 mg 底物的OBC,6 mg/200 mg 底物的CTS 作為正對(duì)照,體外培養(yǎng)24小時(shí)后,取樣測(cè)定甲烷產(chǎn)量、瘤胃發(fā)酵指標(biāo)和微生物
3、數(shù)量。結(jié)果表明:在底物中添加CTS,BTS和OBC 對(duì)瘤胃pH、產(chǎn)氣量和揮發(fā)性脂肪酸沒(méi)有影響。但添加CTS和BTS提高了丙酸比例、降低了瘤胃氨氮濃度。添加BTS 線性和二次降低了甲烷產(chǎn)量,相反,添加OBC 線性提高了甲烷產(chǎn)量。BTS不影響甲烷菌的數(shù)量,但是OBC 顯著增加了甲烷菌數(shù)量,BTS 降低了原蟲的數(shù)量,且隨BTS的增加呈線性和二次下降。在底物中添加BTS和OBC 對(duì)原蟲和黃色瘤胃球菌的數(shù)量沒(méi)有影響,但是BTS 有降低產(chǎn)琥珀酸絲狀
4、桿菌的趨勢(shì)。試驗(yàn)2 添加0,1.9,3.8和7.6 mg/200 mg 底物的PTS,同樣6 mg/200 mg 底物的CTS 作為正對(duì)照,同樣體外培養(yǎng)24小時(shí)后,取樣測(cè)定甲烷產(chǎn)量、瘤胃發(fā)酵指標(biāo)和微生物數(shù)量。結(jié)果表明:在底物中添加CTS 對(duì)產(chǎn)氣沒(méi)有影響,但是隨著PTS 添加量的增加,產(chǎn)氣量呈線性和二次下降。CTS和PTS 對(duì)瘤胃pH和乙酸比例沒(méi)有影響,但甲烷、氨氮含量和乙丙比卻顯著下降且隨PTS 添加量增加呈線性和二次下降。丙酸比例隨著
5、CTS和PTS的添加增加而增加。添加PTS 有增加總揮發(fā)性脂肪酸濃度的趨勢(shì),但是隨著CTS和PTS的增加丁酸的比例卻降低。在底物中添加CTS和PTS可以降低原蟲和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的數(shù)量,且PTS 隨添加量的增加呈線性和二次下降,但是甲烷菌和真菌的數(shù)量沒(méi)有影響。CTS 對(duì)黃色瘤胃球菌的數(shù)量沒(méi)有變化,但是PTS 卻顯著降低了黃色瘤胃球菌的數(shù)量,且隨PTS 添加量的增加呈線性和二次降低。由此可見(jiàn),在粗茶皂素中對(duì)甲烷產(chǎn)量和瘤胃發(fā)酵以及瘤胃微生物
6、起作用的是其中的皂甙組分,而非皂甙活性物質(zhì)有能增加甲烷產(chǎn)量作用。
試驗(yàn)三研究了純品茶皂素對(duì)小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)8個(gè)處理,分別灌注0,2.64,3.1,3.65,4.3,5.06,5.95,7.0 g/kg小鼠體重的茶皂甙。由試驗(yàn)結(jié)果可得,茶皂甙對(duì)ICR小鼠的半數(shù)致死量(LD50)為3.24 g/kg,且此半數(shù)致死量的可信限為2.86-3.54g/kg。LD5和LD95分別為1.87 g/kg和5.60 g/kg小鼠死
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