豬葡萄球菌多重PCR檢測方法的建立與ZLT-1株的蛋白全譜分析.pdf

1、豬葡萄球菌是一種環(huán)境常見菌，也是仔豬滲出性皮炎的主要病原。本研究根據(jù)GenBank已發(fā)表的豬葡萄球菌的6種脫落毒素基因序列，設(shè)計合成了6對特異性引物，通過特異性、敏感性和重復(fù)性試驗建立了可行的豬葡萄球菌及脫落毒素的多重 PCR檢測方法。對臨床分離到的9株豬葡萄球菌的檢測結(jié)果顯示，均擴增出了與預(yù)期大小相符的23SrDNA（662bp）條帶；同時，其中6株擴增出了ExhA（316bp，2株）、ExhC（525bp，2株）和ShetA（814

2、bp，2株）基因特異性條帶；另外3株均未擴增出任何毒素基因條帶，鑒定為無毒力型菌株，以上結(jié)果與生化鑒定、單重 PCR和測序結(jié)果相符。此多重 PCR方法不僅操作簡便、經(jīng)濟快速，而且具有高度特異性、敏感性和良好的重復(fù)性，可用于仔豬滲出性皮炎的診斷和豬葡萄球菌的快速鑒定。
　　為了深入地研究豬葡萄球菌的代謝、生長特性及對宿主的作用。本研究運用上述多重PCR檢測方法對48株葡萄球菌進行篩選，結(jié)合臨床背景，經(jīng)動物回歸試驗最終篩選出了一株具有

3、較強致病力的豬葡萄球菌ZLT-1株，對ZLT-1株的菌體和培養(yǎng)物上清蛋白進行抽提，樣品檢測合格后經(jīng)膠內(nèi)酶解、液相色譜分離，最終進入質(zhì)譜儀進行蛋白質(zhì)全譜分析，通過GO、COG和通路分析對其結(jié)果進行詮釋。結(jié)果表明，豬葡萄球菌菌體鑒定出919種蛋白，上清中鑒定出111種蛋白，大多數(shù)蛋白均參與了細胞生物過程、新陳代謝、黏附和催化過程；葡萄球菌常見33種致病因子中只有脫落毒素、乙酰轉(zhuǎn)移酶、烯醇酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶；通路分析發(fā)現(xiàn)了11種蛋白，