華南地區(qū)豬群中葡萄球菌的分離鑒定及豬葡萄球菌EXHC毒素基因的原核表達(dá).pdf

1、豬滲出性皮炎是由葡萄球菌引起的一種以哺乳仔豬和剛斷奶仔豬的急性或超急性接觸性傳染病，患病仔豬主要以滲出性，發(fā)熱、脫水和死亡為主要臨床特征，具有傳播快、死亡率高等特點(diǎn)。該病嚴(yán)重影響仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育，給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　本研究針對(duì)華南周邊地區(qū)疑似患有滲出性皮炎的病豬進(jìn)行了葡萄球菌的分離鑒定及分類(lèi)；通過(guò)對(duì)篩選出的7株豬葡萄球菌脫落毒素基因的檢測(cè)建立了脫落毒素基因的PCR檢測(cè)方法；對(duì)鑒定出的EXHC基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)。

2、
　　1、通過(guò)鏡檢、生化鑒定初步分離到了16株葡萄球菌；動(dòng)物致病性試驗(yàn)中，豬葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、松鼠源葡萄球菌、產(chǎn)色葡萄球菌的試驗(yàn)組小鼠的死亡率分別為：100％，83.3%，66.7%，100%，16.7%，而模仿葡萄球菌、科氏葡萄球菌的實(shí)驗(yàn)組有沒(méi)有死亡個(gè)體；藥敏試驗(yàn)中這些菌株對(duì)頭孢類(lèi)、新生霉素等抗生素高度敏感，對(duì)青霉素類(lèi)抗生素產(chǎn)生耐藥性。
　　2、參照葡萄球菌Gap(glyceraldehyde-3-ph

3、osphate dehydrogenases,甘油醛-三磷酸脫氫酶)和16S rRNA基因的通用引物對(duì)初步鑒定出的16株葡萄球菌進(jìn)行了基因克隆和序列分析。Gap基因克隆測(cè)序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行Blast分析，分離的16株菌株可以歸類(lèi)為 Staphylococcus hyicus、Staphylococcus epidermidis、Staphylococcus chromogenes、Staphylococcus simulans、St

4、aphylococcus sciuri、Staphylococcus cohnii、Staphylococcus haemolyticus，其同源性分別為100%、99%、93%、100%、98%、96%、99%，以上分離到的7類(lèi)菌種與不同亞種之間的同源性75.6～99%。16S rRNA基因克隆、序列比對(duì)分析顯示葡萄球菌屬的不同亞種之間核苷酸差異性不明顯，同源性為92%以上。
　　3、利用建立的PCR檢測(cè)方法對(duì)分離的7株豬葡萄球

5、菌進(jìn)行脫落毒素基因的檢測(cè)。結(jié)果顯示SHETA的檢出率為100%；EXHA的檢出率為28.7%；EXHC、EXHB的檢出率均為14.3%。
　　4、對(duì)分離的GDZC株進(jìn)行了Gap基因的克隆及序列分析，并對(duì)EXHC基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)。結(jié)果表明，該菌株Gap基因與Genbank已發(fā)表豬葡萄球菌（AF495492）菌株的核苷酸同源性為99%；EXHC基因與Genbank上已發(fā)表的丹麥分離株(AF515455)核苷酸序列同源性為100%。