四種雞球蟲多價DNA疫苗免疫和程序及其穩(wěn)定性研究.pdf

1、雞球蟲病是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疾病之一，危害比較嚴重主要有柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲4個種，臨床上往往為這4個種的混合感染，因此研制抵抗這4種雞球蟲混合感染的多價疫苗顯得十分迫切，本實驗室已經(jīng)構建了抵抗4種球蟲的混合多價DNA疫苗和多價多表位DNA疫苗，初步顯示了良好的免疫保護效果，為進一步提高多價DNA疫苗的免疫保護效果，本研究對混合多價DNA疫苗的配比進行了優(yōu)化，對多價多表位DNA疫苗的免疫程

2、序和穩(wěn)定性進行了研究，如下:
　　 本研究第一部分首先在對四種雞艾美耳球蟲免疫調節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IFN-γ、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-Em8-IL-2和pVAX1.0-3-1E-IFN-γ混合免疫程序基礎上，對其免疫劑量的最佳配比再進行篩選。將柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)免疫調節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IFN-γ、毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)免疫調節(jié)型D

3、NA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)免疫調節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-Em8-IL-2和堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)免疫調節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-3-1 E-IFN-γ按5μg∶5μg∶5μg∶5μg、10μg∶25μg∶25μg∶10μg、15μg∶35μg∶35μg∶15μg、20μg∶50μg∶50μg∶20μg的劑量混合后免疫雛雞，試驗對各配比劑量設計了感染柔嫩艾美耳

4、球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲和四種混合感染各5個試驗組及相應的5個非免疫攻蟲對照組與一個非免疫非攻蟲對照組，共26組。結果發(fā)現(xiàn)免疫劑量混合組15μg∶35μg∶35μg∶15μg組在減少E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和四個蟲種種混合的免疫保護效果最好，ACI分別為188.50，180.50，180.91和174.59。免疫劑量混合組10μg∶25μg∶25μg∶10μg組對E.

5、maxima感染組的免疫保護效果較好，ACI為181.69。
　　 本研究第二部分是將本實驗室構建的免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2進行免疫程序篩選，在此基礎上再進行穩(wěn)定性實驗。主要包括以下幾個方面:
　　 1四種雞艾美耳球蟲免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗免疫劑量的篩選
　　 將免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1

6、-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分別以2μg、10μg、25μg、50μg、100μg、200μg免疫雛雞，各劑量分別設計了感染柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲各4個試驗組及相應的4個非免疫攻蟲對照組與一個非免疫非攻蟲對照組，共29組。結果發(fā)現(xiàn)，柔嫩艾美耳球蟲組免疫保護效果最好的免疫劑量為25μg，ACI為184.5。毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲免疫保護效果最好的免疫劑量均為10μ

7、g，ACI分別為184.58、181.27、181.48。
　　 2四種雞艾美耳球蟲免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗免疫途徑的篩選
　　 將免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分別以肌肉注射、靜脈注射、皮下注射、口服、滴鼻滴眼五個途徑免疫雛雞，各途徑分別設計了感染柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲各4個試驗組及相應的4個非免疫攻

8、蟲對照組與一個非免疫非攻蟲對照組，共25組。結果發(fā)現(xiàn)，各免疫攻蟲組中腿部肌肉注射組ACI均最高。其中腿部肌肉注射攻柔嫩艾美耳球蟲組ACI為183.24;攻毒害艾美耳球蟲的ACI為184.76;攻巨型艾美耳球蟲ACI為181.96;攻堆型艾美耳球蟲ACI為174.79。腿部肌肉注射組免疫效果優(yōu)于其他免疫途經(jīng)組。
　　 3四種雞艾美耳球蟲免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗首免日齡和免疫次數(shù)的篩選
　　 設計了一周齡首免不加強免疫

9、、一周齡首免二周齡加強免疫、二周齡首免不加強免疫和二周齡首免三周齡加強免疫四個實驗組，分別免疫DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2。各程序設計了感染柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲各4個試驗組及相應的4個非免疫攻蟲對照組與一個非免疫非攻蟲對照組，共21組。結果發(fā)現(xiàn)，加強免疫組比非免疫組免疫保護效果好，所有加強免疫組的ACI都大于160;二周齡首免組比一周齡首免

10、組免疫保護效果好，二周齡首免三周齡加強免疫組效果最好。
　　 4四種雞艾美耳球蟲免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗免疫穩(wěn)定性實驗
　　 將免疫調節(jié)型多價多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分別在不同的溫度(-20℃、4℃和室溫)下分別保存1個月、3個月、6個月，分別免疫雛雞，各溫度組分別設計了感染柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲各4個試驗組及