三化螟微衛(wèi)星分子標記開發(fā)及異步化發(fā)育的初步探索.pdf

1、三化螟Scirpophagaincertulas(Walker)屬鱗翅目、螟蛾科，是水稻單食性、鉆蛀性的本地害蟲，廣泛分布于長江流域以南稻區(qū)，沿江、沿海平原地區(qū)受害尤其嚴重。然而，目前對于三化螟的認識還很淺顯，更多的是通過篩選高效化學農(nóng)藥來進行防治。本研究針對三化螟種群結(jié)構的內(nèi)穩(wěn)定性，利用抑制PCR富集法分離出三化螟基因組微衛(wèi)星位點，并評價及篩選出可以用于后續(xù)遺傳多樣性研究的微衛(wèi)星標記;利用AFLP及線粒體COⅠ和核糖體ITS標記分析三

2、化螟的異步化發(fā)育，為三化螟內(nèi)穩(wěn)定性機制的研究、螟害系統(tǒng)控制對策的開辟提供理論基礎，主要結(jié)果如下:
　　(1)采用抑制PCR的方法成功構建了三化螟的微衛(wèi)星文庫。挑取的201個陽性克隆測序結(jié)果表明，187個克隆含有微衛(wèi)星序列，抑制PCR篩選微衛(wèi)星序列的準確率達到93.03％。對該187個微衛(wèi)星序列進行比對，得到18個不同的微衛(wèi)星序列，并成功提交至GenBank。對這18個序列設計了30對特異性引物，經(jīng)檢測，有10對引物能擴增出穩(wěn)定的產(chǎn)

3、物。
　　(2)利用開發(fā)出的10對微衛(wèi)星引物對四川德陽種群48個個體進行擴增，篩選出的5個三化螟微衛(wèi)星引物，其擴增效率達95％以上，5個位點的等位基因數(shù)（A）從11到17不等。該種群的觀察雜合度(HO)在0.021到0.532之間，預期雜合度（HE）在0.837到0.914之間，Shannon's多樣性指數(shù)在2.0348～2.4943之間，Nei's基因多樣性指數(shù)在0.8349到0.9119之間，說明供試個體之間存在豐富的遺傳多樣

4、性。Hardy-Weinberg平衡測試顯示該種群顯著偏離平衡，進一步分析表明，造成偏離平衡的因素可能是雜合度不足。連鎖不平衡測驗顯示5個位點之間均存在連鎖不平衡。所有的微衛(wèi)星座位沒有明顯的遺傳變異。
　　(3)利用AFLP技術研究分析2010年及2011年三化螟早發(fā)類和遲發(fā)類之間的差異，結(jié)果顯示該兩年中種群內(nèi)個體之間的遺傳一致度總體較高，遺傳相似系數(shù)（Gs值）介于0.71～0.84，范圍較小，遺傳變異不太明顯。根據(jù)遺傳相似系數(shù)，

5、非加權算術平均聚類(UPGMA)結(jié)果發(fā)現(xiàn)三化螟種群內(nèi)出現(xiàn)明顯的分化，極端早發(fā)類和極端遲發(fā)類各自聚為一類。主坐標分析和聚類分析結(jié)果基本一致。但這些數(shù)據(jù)僅從統(tǒng)計上說明三化螟存在異步化發(fā)育，其關鍵作用機制有待繼續(xù)研究。
　　(4)利用COⅠ和ITS序列試圖探索三化螟早發(fā)和遲發(fā)類之間的差異，對特異性引物擴增出的三化螟早發(fā)和遲發(fā)個體COⅠ和ITS序列進行比對分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試三化螟極端早發(fā)類和極端遲發(fā)類之間無明顯差異。說明，該二段基因與三化