3種石斑魚微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及跨種擴(kuò)增.pdf

1、微衛(wèi)星標(biāo)記由于多態(tài)性高、共顯性等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于生物群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建等方面。石斑魚是重要的世界性海水養(yǎng)殖魚類，然而其遺傳多樣性的研究還十分有限。目前在石斑魚中缺乏足夠的微衛(wèi)星標(biāo)記。因此，為了評估石斑魚的遺傳多樣性，進(jìn)行分子輔助育種以指導(dǎo)生產(chǎn)，迫切需要開發(fā)大量的微衛(wèi)星標(biāo)記。通過FIASCO法構(gòu)建七帶石斑魚(Epinephelusseptemfasciatus)、青石斑魚(Epinephelus awoara)、美洲黑石斑

2、魚(Centropristisstriata)的基因組微衛(wèi)星富集文庫，分離微衛(wèi)星DNA序列并對其特征進(jìn)行分析?；蚪MDNA經(jīng)Mse I限制性內(nèi)切酶消化后，酶切片段與Mse I接頭連接，用生物素標(biāo)記的寡核苷酸探針與其雜交，雜交復(fù)合物結(jié)合到包被有鏈霉親和素的磁珠上，變性洗脫獲得單鏈目的片段，經(jīng)PCR擴(kuò)增形成雙鏈，然后克隆到pMD18-T載體上，轉(zhuǎn)化至DH5α中。菌落PCR法篩選陽性克隆，挑選不同大小的陽性克隆測序(ABI3730)。從七帶石

3、斑魚、青石斑魚、美洲黑石斑魚的基因組微衛(wèi)星富集文庫中，分別得到66，56，39個(gè)微衛(wèi)星序列。應(yīng)用primer3軟件對所篩選的微衛(wèi)星序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，分別得到55，36，28對引物。通過6％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行篩選，3種石斑魚中分別得到12，12，11個(gè)多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記，并對各個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)目、等位基因片段大小范圍、觀察雜合度、期望雜合度指標(biāo)進(jìn)行初步分析。結(jié)果表明：FIASCO法能有效提高微衛(wèi)星標(biāo)記篩選效率。將研究所得到的多態(tài)性微