云紋石斑魚與褐石斑魚的比較研究.pdf

1、本文從形態(tài)、細(xì)胞和分子水平對(duì)分類上存在混淆的云紋石斑魚(Epinephelus moara)和褐石斑魚(E. bruneus)進(jìn)行了比較研究，以澄清它們?cè)诜诸惿系囊蓡?wèn)、弄清其遺傳背景并篩選可以鑒別兩者的特異性分子標(biāo)記，為云紋石斑魚和褐石斑魚的理論研究、生產(chǎn)實(shí)踐及種質(zhì)資源的保護(hù)提供重要資料。主要結(jié)果如下： 1.2種石斑魚的體形和體表橫帶等外部形態(tài)特征非常相似，但體表斑紋不同，F(xiàn)isher逐步判別法表明兩者在背鰭鰭條、鰓耙和幽門盲囊

2、等方面差異達(dá)到極顯著水平(p<0.001)。兩者骨骼系統(tǒng)均由腦顱、咽顱、脊柱、肋骨和附肢骨骼組成，主軸和附肢骨骼的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本相同，但在腦顱的眶前骨和眶后骨、咽顱的前鰓蓋骨和尾舌骨、附肢骨骼的髓棘間骨及尾下骨與尾鰭鰭棘連接方式等方面存在差異，骨骼差異可作為屬間或種間的分類依據(jù)。結(jié)果確認(rèn)云紋石斑魚和褐石斑魚為為形態(tài)特征可以鑒別的2種石斑魚。 2.利用常規(guī)核型、Ag-NORs、C-帶、重復(fù)序列(5S rDNA、18S rDNA和(T

3、TAGGG)n)的熒光原位雜交技術(shù)分析了2種石斑魚的細(xì)胞遺傳學(xué)特性： 2種石斑魚二倍體染色體數(shù)目均為48，但單臂染色體和雙臂染色體個(gè)數(shù)不同，因此核型不同：云紋石斑魚為2n=48，4SM+44T(NF=52)；褐石斑魚為2n=48，2M+4SM+42T(NF=54)。銀染和FISH均顯示，云紋石斑魚和褐石斑魚中期分裂相中NORs的數(shù)目不同。Ag-NORs主要為4個(gè)和5個(gè)，分別位于2對(duì)(第9和24)和3對(duì)(第2、9和24)雙臂染色體

4、短臂或亞著絲粒區(qū)，種內(nèi)Ag-NORs數(shù)目和分布模式均具多態(tài)性；2種石斑魚18S rDNA的FISH雜交信號(hào)分別為4個(gè)和6個(gè)，位于雙臂染色體亞著絲粒區(qū)，不同染色體對(duì)雜交信號(hào)強(qiáng)弱不同。2種石斑魚均有1對(duì)5S rDNA雜交信號(hào)位于1對(duì)中等大小端部著絲粒染色體亞著絲粒位置。 2種石斑魚大多數(shù)染色體均具有著絲粒C-帶，有些同時(shí)還具有端粒C-帶；云紋石斑魚第9對(duì)染色體和褐石斑魚第2對(duì)染色體短臂相應(yīng)的Ag-NORs區(qū)均具有恒定異染色質(zhì)C-帶。

5、2種石斑魚大多數(shù)染色體著絲粒位置及部分染色體近端粒區(qū)呈DAPI陽(yáng)性帶，與C-帶結(jié)果一致。2種石斑魚均僅在染色體的端粒位置而沒(méi)有在中間部位檢測(cè)到端粒序列(TTAGGG)n探針雜交信號(hào)，云紋石斑魚信號(hào)強(qiáng)度及大小比較均勻，而褐石斑魚染色體組有10對(duì)端部著絲粒染色體末端的端粒序列雜交信號(hào)強(qiáng)度和大小均明顯強(qiáng)于其它染色體上的雜交信號(hào)(約4倍以上)。結(jié)果顯示2種石斑魚具有較近的親緣關(guān)系，為石斑魚屬中的特化類群，在進(jìn)化上云紋石斑魚比褐石斑魚更原始。

6、 3.采用AFLP、RAPD及ISSR分子標(biāo)記分析了2種石斑魚遺傳多樣性。10對(duì)AFLP引物、30個(gè)RAPD引物和21個(gè)ISSR引物分別產(chǎn)生997、226和148條擴(kuò)增片段，多態(tài)位點(diǎn)百分比分別為36.31％、34.51％和27.03％；種間分化明顯，平均遺傳距離D分別為0.2987、0.3178和0.1792，Shannon's信息指數(shù)I分別為0.2247、0.2251和0.1753，遺傳分化系數(shù)Gst分別為0.7997、0.829

7、8和0.6460；種內(nèi)遺傳多樣性水平均不高，遺傳相似度S分別為0.9632和0.9630、0.9775和0.9691、0.9414和0.9769。mtDNA的16S rRNA、Cytb和ND2基因及核基因組中核糖體基因簇的ITS1區(qū)進(jìn)化分析均表明：石斑魚屬是石斑魚亞科中最新演化的類群，云紋石斑魚和褐石斑魚為石斑魚屬內(nèi)的近緣種。 將物種特異性的ISSR及RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化并獲得4個(gè)能鑒別2種石斑魚的穩(wěn)定SCAR標(biāo)記。選取ND2基因和