南海五種常見石斑魚的RFLP和SSCP研究.pdf

1、本文使用RFLP技術(shù)分析了南海海域石斑魚屬野生蜂巢石斑魚、鮭點(diǎn)石斑魚、青石斑魚、赤點(diǎn)石斑魚和七帶石斑魚的種內(nèi)和種間遺傳多樣性、種間親緣關(guān)系和系統(tǒng)分化，構(gòu)建了這五種魚的酶切物理圖譜，并建立了識(shí)別它們的分子遺傳標(biāo)記。 用差速離心法從蜂巢石斑魚、鮭點(diǎn)石斑魚、青石斑魚、赤點(diǎn)石斑魚和七帶石斑魚五種魚的新鮮肝組織中提取線粒體DNA。純化后的mtDNA用識(shí)別5、6堿基序列的17種限制性內(nèi)切酶，即BamH I，Bgl I，Bgl II，Dra

2、I，EcoR I，EcoR V，Hind III， Kpn I，Mlu I，Pst I，Pvu II，Sal I，Sca I，Sma I，Sty I，Xba I和Xho I進(jìn)行單酶切和雙酶切，用凝膠成像分析系統(tǒng)檢測(cè)。根據(jù)各酶切片段的長(zhǎng)度，測(cè)算出蜂巢石斑魚、鮭點(diǎn)石斑魚、青石斑魚、赤點(diǎn)石斑魚和七帶石斑魚的mtDNA分子大小分別為18.52±0.21kb、18.44±0.21 kb、18.56±0.18 kb、18.57±0.19 kb和

3、18.36±0.11 kb。 采用基因多樣性指數(shù)（h）、酶切類型間平均遺傳距離（P）和核苷酸多樣性指數(shù)（π）等指標(biāo)對(duì)群體內(nèi)的遺傳多樣性進(jìn)行了描述。在蜂巢石斑魚、鮭點(diǎn)石斑魚、青石斑魚、赤點(diǎn)石斑魚和七帶石斑魚群體內(nèi)分別檢出了8種、5種、8種、5種和2種酶切類型，基因多樣性指數(shù)（h）分別為：0.8943、0.6186、0.9242、0.6927和0.1820；酶切類型間平均遺傳距離（P）分別為：0.62±0.31％、0.64±0.37

4、％、1.12±0.55％、0.72±0.42％和0.45％；核苷酸多樣性指數(shù)（π）分別為：0.22％、0.13％、0.46％、0.17％和0.04％。這些結(jié)果說(shuō)明湛江沿海野生石斑魚的遺傳變異水平較高，遺傳多樣性比較豐富。 蜂巢石斑魚、鮭點(diǎn)石斑魚、青石斑魚、赤點(diǎn)石斑魚和七帶石斑魚種間研究的結(jié)果是：種間凈遺傳距離（Pnet）分別為：0.0694（蜂巢-鮭點(diǎn)）、0.1337（蜂巢-青石斑）、0.1090（蜂巢-赤點(diǎn)）、0.1286（蜂

5、巢-七帶）、0.1590（鮭點(diǎn)-青石斑）、0.0825（鮭點(diǎn)-赤點(diǎn)）、0.1153（鮭點(diǎn)-七帶）、0.1131（青石斑-赤點(diǎn)）、0.0724（青石斑-七帶）和0.1336（赤點(diǎn)-七帶）。用NJ法和UPGMA法對(duì)這五種石斑魚進(jìn)行聚類分析，兩種方法得出的分子聚類圖具有相同的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。從結(jié)果可知，蜂巢石斑魚和鮭點(diǎn)石斑魚首先聚在一起，然后和赤點(diǎn)石斑魚聚類，最后再與青石斑魚和七帶石斑魚相聚。 通過(guò)單、雙酶切分析，分別構(gòu)建了蜂巢石斑魚10種

6、酶共20個(gè)酶切位點(diǎn)、鮭點(diǎn)石斑魚9種酶共17個(gè)酶切位點(diǎn)、青石斑魚8種酶共16個(gè)酶切位點(diǎn)、赤點(diǎn)石斑魚7種酶共12個(gè)酶切位點(diǎn)和七帶石斑魚8種酶共13個(gè)酶切位點(diǎn)的酶切物理圖譜。 BglⅡ和XhoⅠ兩種內(nèi)切酶的酶切帶型可作為鑒別這五種石斑魚的分子遺傳標(biāo)記。 此外，本文還使用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)這五種石斑魚進(jìn)行了初步分析。使用通用引物L(fēng)14841和H15149在這五種石斑魚的總DNA中均擴(kuò)增出mtDNA Cyt-b基因編碼區(qū)中大小