大菱鲆與生長(zhǎng)、耐高溫性狀相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記篩選及微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)研究.pdf

1、大菱鲆（Scophthalmus maximus L．）是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖魚類，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來(lái)，大菱鲆的種質(zhì)退化現(xiàn)象較為嚴(yán)重。為保證我國(guó)大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的健康、穩(wěn)定、可持續(xù)發(fā)展，目前已開始對(duì)其進(jìn)行遺傳改良。本文中系統(tǒng)闡述了國(guó)內(nèi)外鲆鰈魚類育種的研究進(jìn)展。根據(jù)當(dāng)前國(guó)際上魚類遺傳育種的研究趨勢(shì)，認(rèn)為采用選擇育種與分子遺傳標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)其進(jìn)行遺傳改良，可望提高育種成效。因此，本研究以大菱鲆為材料，篩選了與生長(zhǎng)、耐高溫

2、性狀相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記，并進(jìn)行了大菱鲆微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)研究。 主要結(jié)果如下： 為了揭示出一些影響魚類生長(zhǎng)發(fā)育速度方面的遺傳信息，本文利用分群分離分析法，以同一批受精卵孵化的同池養(yǎng)殖大菱鲆（Scophthalmus maximus L．）生長(zhǎng)性狀發(fā)生分離的群體為材料，進(jìn)行微衛(wèi)星DNA遺傳分析。30個(gè)多態(tài)性微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)生長(zhǎng)高值組（F組）和生長(zhǎng)低值組（S組）各10個(gè)樣本建立的DNA混合池進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，在兩池間出現(xiàn)了7個(gè)差異片段。通

3、過(guò)對(duì)兩組大菱鲆個(gè)體PCR擴(kuò)增出的差異條帶進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析微衛(wèi)星位點(diǎn)與大菱鲆生長(zhǎng)性狀的相關(guān)性。結(jié)果表明，有1個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)SmaC10在355bp的等位基因片段與大菱鲆生長(zhǎng)性狀存在一定的負(fù)相關(guān)性；有4個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)SmaC02、SmaC06、SmaC09、B11-I12/6/3分別在258bp、182bp、226bp、175bp的等位基因片段與大菱鲆生長(zhǎng)性狀存在正相關(guān)性，其中位點(diǎn)Smac09在226bp的等位基因片段與生長(zhǎng)性狀的正相關(guān)性極顯著，

4、相關(guān)系數(shù)達(dá)到0．354（P<0．01）。微衛(wèi)星位點(diǎn)SmaC09所擴(kuò)增出的等位基因片段可作為具有良好生長(zhǎng)特性人工選育群體的分子標(biāo)記指導(dǎo)大菱鲆的輔助育種。 采用微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)分析大菱鲆耐高溫相關(guān)特性，為大菱鲆的分子輔助育種提供合適的分子標(biāo)記。大菱鲆經(jīng)過(guò)耐高溫實(shí)驗(yàn)處理，將其區(qū)分為耐高溫組與不耐高溫組，用于實(shí)驗(yàn)分析。采用Salah．M（1997）的方法提取大菱鲆肌肉組織的DNA，進(jìn)行微衛(wèi)星引物PCR（SSR-PCR）擴(kuò)增，所用引物為

5、已知的30個(gè)大菱鲆微衛(wèi)星位點(diǎn)的側(cè)翼保守序列。對(duì)PCR擴(kuò)增出的差異條帶進(jìn)行個(gè)體統(tǒng)計(jì)，最后進(jìn)行微衛(wèi)星位點(diǎn)與耐高溫性狀的相關(guān)性分析。結(jié)果表明，有1個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)Sma-USC25478bp的等位基因片段與大菱鲆耐高溫性狀存在一定的負(fù)相關(guān)性；有3個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)Sma-USC24、Sma-USC27、Sma-USC31分別在106bp、286bp、135bp的等位基因片段與大菱鲆耐高溫性狀存在正相關(guān)性，其中位點(diǎn)Sma-USC27286bp的等位基因片

6、段與耐高溫性狀的正相關(guān)性極顯著，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0．383（P<0．01），其余3個(gè)位點(diǎn)為一般顯著性相關(guān)。微衛(wèi)星位點(diǎn)Sma-USC27所擴(kuò)增出的差異等位基因片段可作為分子標(biāo)記指導(dǎo)耐熱大菱鲆的輔助育種。 利用FIASCO的方法構(gòu)建了大菱鲆以（GT）。為主的微衛(wèi)星DNA富集文庫(kù)，檢測(cè)結(jié)果證明該微衛(wèi)星DNA文庫(kù)的富集效率在43％左右。測(cè)序得到88條含有微衛(wèi)星DNA的序列的克隆，共得到91個(gè)微衛(wèi)星DNA位點(diǎn)。在這些微衛(wèi)星DNA位點(diǎn)中，除（C