許氏平鲉微衛(wèi)星標記開發(fā)及群體遺傳結構分析.pdf

1、許氏平鲉（Sebastes schlegelii）是我國北方重要的養(yǎng)殖和捕撈魚類之一，具有很高的經(jīng)濟價值。過度捕撈和近岸生態(tài)環(huán)境的變化使野生許氏平鲉資源逐漸減少，野生群體遺傳多樣性受到威脅。對野生群體種質資源狀況充分了解的基礎上，通過合理的向天然水域投放人工繁殖苗種進行增殖放流（Stock Enhancement），可以在一定程度增加許氏平鲉資源量，保護生物多樣性。同時，從野生群體中選育出生長速度快、抗病能力強的優(yōu)質品種進行人工養(yǎng)殖也具

2、有重要的經(jīng)濟效益和社會效益。微衛(wèi)星標記技術為許氏平鲉種質資源研究和良種選育工作提供了一個方便、有效的工具。本研究采用磁珠富集法構建許氏平鲉微衛(wèi)星富集文庫，開發(fā)出51對具有多態(tài)性的微衛(wèi)星標記。并選用部分高多態(tài)性微衛(wèi)星標記對山東半島五個地理群體（煙臺牟平區(qū)、長島縣，日照東港區(qū)、威海榮成市、青島膠州灣）的野生群體遺傳結構進行評估。
　　1、許氏平鲉微衛(wèi)星標記的開發(fā)及評價。
　　用Sau3AI對許氏平鲉基因組DNA酶切并收集400~

3、1000bp的片段，含微衛(wèi)星序列的DNA片段與生物素標記的寡核苷酸探針(CA)12和(GA)12雜交后被鏈霉親和素包被的磁珠捕獲，然后與載體連接并轉化至DH5α感受態(tài)細胞中，構建許氏平鲉微衛(wèi)星序列富集文庫。采用三引物PCR法對353個菌落進行了陽性克隆確認，篩選得到213個陽性克隆，重組率為60.34％。陽性克隆測序結果顯示其中188個克隆含微衛(wèi)星核心序列，占88.26%。核心序列大部分為CA/GT和GA/CT重復單元，其中完美型（Pe

4、rfect）83個，非完美型（Imperfect）47個，復合型（Compound）58個，分別占44.15%，25.00%和30.85%。
　　利用軟件設計并合成了169對微衛(wèi)星引物，其中144對引物能擴增出清晰的目的條帶。在使用32個長島野生群體個體對這些引物進行評價時有51對引物表現(xiàn)出了多態(tài)性。所有位點上共得到384個等位基因片段，每個位點的等位基因數(shù)（Na）為2～21個，平均等位基因數(shù)為7.5294；平均觀測雜合度（Ho）

5、、平均期望雜合度（He）、平均多態(tài)信息含量（PIC）分別為0.5106、0.5794和0.5443。其中高度（PIC>0.5）和中度（0.25

6、berg平衡。結果說明本研究所篩選的微衛(wèi)星標記大部分都具有較高的多態(tài)性，可以用于許氏平鲉的遺傳相關分析。
　　2、五個許氏平鲉地理群體的遺傳結構分析。
　　選用17對微衛(wèi)星引物分析了山東半島5個野生群體的群體遺傳結構，采用分辨率高的毛細管電泳技術進行基因分型。每個群體所有位點平均等位基因數(shù)在14.353到14.824之間，平均觀測雜合度為0.785~0.793，平均期望雜合度為0.824～0.841，多態(tài)信息含量為0.791

7、~0.808。說明這五個群體的遺傳多樣性均較高，選擇育種的潛力大。近交系數(shù)（Fis）顯著性檢驗表明5個群體各位點的平均近交系數(shù)為0.025~0.065，榮成群體的平均近交系數(shù)最低，青島群體則出現(xiàn)了極顯著的近交現(xiàn)象（P<0.01）。5個群體之間的遺傳分化指數(shù)(Fst)為-0.0027~0.0064，青島群體與牟平、日照和榮成群體均產(chǎn)生了顯著的分化，與長島群體產(chǎn)生了極顯著的分化，但分化指數(shù)均小于0.05，表明為各群體間分化程度較低。各群體間

8、的遺傳相似性指數(shù)為0.8844～0.9350，遺傳距離為0.0672～0.1229，青島群體與各群體間的遺傳距離均大于其余各群體間的遺傳距離，遺傳相似性指數(shù)則低于其余群體間的相似性指數(shù)，榮成群體和日照群體間的遺傳相似性指數(shù)最高，遺傳距離最小。根據(jù)Nei遺傳距離采用UPGMA法構建聚類分析圖，日照群體和榮成群體聚類后再與長島群體聚類，然后與牟平群聚為一支，青島群體單獨為一支。主成分分析結果顯示群體散點圖在第一主成分上基本呈均勻分布狀態(tài)，青