版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、眾所周知,通過基因敲除的方法研究桿狀病毒基因的功能是一種很有效的手段,特別是探究基因在病毒感染周期中對病毒復(fù)制和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響方面尤為突出。GP88蛋白是家蠶桿狀病毒(BmNPV)基因組中的一種DNA結(jié)合蛋白,被認(rèn)為是一種病毒基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,然而,在病毒DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄過程中GP88蛋白是否起著某種調(diào)節(jié)作用還未可知。在這項工作中,我們運用Red重組技術(shù)敲除了BmNPV的gp88基因,構(gòu)建了gp88缺失型病毒gp88-ko-Bacm
2、id;再利用Bac-to-Bac技術(shù)構(gòu)建了gp88補回型病毒gp88-re-Bacmid,再將三種病毒Bacmid(wtBacmid、gp88-ko-Bacmid和gp88-re-Bacmid)DNA轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞,經(jīng)過實驗分析發(fā)現(xiàn),gp88缺失型病毒TCID5o為零,而gp88修復(fù)型病毒的TCID5o則與野生型基本相同(p>0.05),這說明gp88基因缺失會導(dǎo)致不能形成具有感染活性的病毒粒子。為了深入了解GP88的生物學(xué)功能,我們利
3、用熒光定量PCR技術(shù)分析了三種病毒Bacmid轉(zhuǎn)染細(xì)胞后病毒基因組DNA的復(fù)制情況以及病毒早期、晚期和極晚期基因的轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果顯示,缺失gp88基因后,病毒基因組DNA的復(fù)制水平較野生型和補回型病毒均顯著降低(p<0.05);病毒早期基因lef-3、ie-1和dnapol,晚期基因vp39與極晚期基因p10的轉(zhuǎn)錄水平相比較修復(fù)型與野生型病毒而言均有顯著降低(p<0.05)。WesternBlot檢測顯示gp88基因的缺失會導(dǎo)致LEF3
4、、VP39以及P10基本不表達(dá),而野生型和gp88補回型病毒則檢測到上述三種蛋白表達(dá)。透射電鏡檢測結(jié)果也進(jìn)一步證實了gp88基因缺失后,細(xì)胞內(nèi)無成熟的病毒粒子形成,而gp88基因修復(fù)后,電鏡觀察的情況與野生型病毒相似,有大量成熟的病毒粒子產(chǎn)生。綜上研究結(jié)果表明:gp88基因的缺失會導(dǎo)致BmNPV基因組復(fù)制水平顯著降低;敲除gp88后會導(dǎo)致BmNPV各時期基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著下降,同時也會導(dǎo)致病毒早期、晚期和極晚期蛋白表達(dá)水平顯著降低或不表
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人類8型皰疹病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄激活蛋白DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的表達(dá)和純化.pdf
- 乙型肝炎病毒X蛋白對細(xì)胞凋亡和病毒復(fù)制的調(diào)控.pdf
- 牛泡沫病毒Bet蛋白對病毒復(fù)制抑制機(jī)制的研究.pdf
- 髓樣細(xì)胞分化蛋白88抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的機(jī)制研究.pdf
- BmNPV膜融合蛋白GP64作用機(jī)制初步研究.pdf
- 大腸桿菌HscB和HscA對DNA復(fù)制起始的影響及其基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控.pdf
- MyD88蛋白抑制乙型肝炎病毒基因復(fù)制的分子機(jī)制研究.pdf
- 狂犬病病毒磷蛋白調(diào)控狂犬病病毒復(fù)制的分子機(jī)制研究.pdf
- 宿主對泡沫病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)機(jī)制研究.pdf
- La蛋白及其突變對乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)錄翻譯啟動和復(fù)制的影響.pdf
- 人RPP蛋白對丙肝病毒復(fù)制的負(fù)調(diào)控作用的研究.pdf
- orf60基因?qū)倚Q桿狀病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用.pdf
- ETS和C-EBP對載脂蛋白F轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究.pdf
- 家蠶抗BmNPV相關(guān)蛋白及BmNPV病毒粒子蛋白組成研究.pdf
- RNA結(jié)合蛋白HuR對乳腺癌細(xì)胞中PDGFC的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- 核心結(jié)合因子α亞基對釉原蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究.pdf
- 胞外DNA結(jié)合蛋白SAP調(diào)控DNA免疫識別的機(jī)制極其應(yīng)用研究.pdf
- La蛋白對乙型肝炎病毒蛋白質(zhì)表達(dá)和病毒復(fù)制的影響研究.pdf
- 載脂蛋白F轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究.pdf
- mTOR信號通路調(diào)控豬瘟病毒復(fù)制的機(jī)制研究.pdf
評論
0/150
提交評論