AngHV ORF51和ORF95基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備.pdf

1、鰻鱺是福建省的優(yōu)勢水產(chǎn)養(yǎng)殖品種，其產(chǎn)值在水產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易中占有重要地位。但是，鰻鱺養(yǎng)殖過程中病害的頻繁發(fā)生和流行給業(yè)者造成了巨大損失，嚴(yán)重阻礙了產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本人所在的實(shí)驗(yàn)室成功從收集的鰻鱺病料中分離出一株鰻鱺病毒，通過電鏡形態(tài)學(xué)觀察、分子生物學(xué)檢測等手段對分離的病毒進(jìn)行鑒定，確定其為給多國鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失的鰻鱺皰疹病毒（AngHV），這也是我國大陸首次分離出該病毒。AngHV是具有囊膜的線性雙鏈DNA病毒，基因組全長248.5

2、Kbp，包含136個(gè)獨(dú)特的開放閱讀框（ORFs）。Beurden等對AngHV-1的結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行鑒定以及定位，結(jié)果顯示，ORF51和ORF95為AngHV-1的主要結(jié)構(gòu)蛋白。因此，ORF51和ORF95有可能會(huì)成為制備基因工程疫苗的候選基因。
　　本文選擇ORF51和ORF95兩個(gè)基因進(jìn)行研究，主要取得以下研究結(jié)果：
　　1.對ORF51和ORF95基因序列及其編碼蛋白的生物信息學(xué)分析，結(jié)果顯示ORF51基因不含保守結(jié)構(gòu)域，

3、其編碼蛋白含有跨膜區(qū)、不含信號(hào)肽；ORF95基因含保守結(jié)構(gòu)域，其編碼蛋白含有跨膜區(qū)和信號(hào)肽，ORF95蛋白與傳染性鮭魚貧血病毒（ISAV）血凝素酯酶蛋白（HA）有關(guān)聯(lián)，可能參與病毒的吸附和出膜。
　　2.設(shè)計(jì)引物，克隆了AngHV-FJ ORF51和ORF95兩個(gè)基因，并利用原核表達(dá)載體pGEX-4T2和pET-32a，在大腸桿菌中表達(dá)了ORF51蛋白和ORF95蛋白。Western Blot分析表明，蛋白得到了成功表達(dá)，大小分別