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1、分類號華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文斑點(diǎn)叉尾徊病毒「6和F10基因的原核表達(dá)及其功能的初步研究TheProkaryoticexPressionofthechaneleatfishvirusO盯6andORFIOgeneandtheirfunetionanalysis研究生:王樹云指導(dǎo)教師:陳孝煊教授李莉娟博士專業(yè):水產(chǎn)養(yǎng)殖獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:水產(chǎn)動(dòng)物疾病防治獲得學(xué)位時(shí)間:2010年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院二O一O年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
2、2010屆碩士研究生學(xué)位論文1材料和方法....................................................................................................……171.1實(shí)驗(yàn)材料......................................................................................……,
3、....……171.1.1病毒、菌株和載體..............................................................................……171.1.2原核載體構(gòu)建主要試劑及來源..........................................................……171.1.3蛋白表達(dá)和鑒定的主要試劑及來源.................
4、.................................……181.1.4實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備及產(chǎn)地..................................................................……181.2實(shí)驗(yàn)方法..........................................................................................
5、.......……191.2.1特異性引物的設(shè)計(jì)與基因的PCR擴(kuò)增.............................................……191.2.2原核表達(dá)載體的構(gòu)建.........................................................................……191.2.3目的基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)...........................
6、......................……221.2.4表達(dá)蛋白的W亡stemBlot檢測..........................................................……222結(jié)果與分析.......................................................................................................…
7、…222.1ORF6ORF10的PCR擴(kuò)增及重組表達(dá)載體的酶切鑒定.................……222.2ORF6和ORF10在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)........................................……242.2.1目的基因的誘導(dǎo)表達(dá)..........................................................................……242.2.2表
8、達(dá)產(chǎn)物的可溶性分析...................................................……,..........……,.243討論...................................................................................................................……27第四章ORF6和ORF10的抗體的制備
9、及其保護(hù)性研究.......................................……291材料和方法.......................................................................................................……291.1實(shí)驗(yàn)材料..................................................
10、...............................................……291.1.1細(xì)胞、病毒..........................................................................................……291.1.2實(shí)驗(yàn)試劑和耗材.....................................................
11、.............................……291.2實(shí)驗(yàn)方法.................................................................................................……301.2.1表達(dá)蛋白的純化...................................................................
12、...............……301.2.2多克隆抗體的制備..............................................................................……301.2.30舒6和ORFro多克隆抗體的保護(hù)性實(shí)驗(yàn)......................................……312結(jié)果與分析.................................
13、..................................……,.............................……312.1多克隆抗體的特異性檢測.....................................................................……312.2ORF6和ORF10多克隆抗體的保護(hù)性研究.......................................
14、..……323討論...................................................................................................................……32參考文獻(xiàn)........................................................................................
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