原核表達(dá)小鼠嗅覺受體MOR28及其多克隆抗體的制備.pdf

1、哺乳動(dòng)物每個(gè)嗅覺感受神經(jīng)(OSN，olfactorysenseneurones)從超過數(shù)百個(gè)甚至上千個(gè)嗅覺受體(OR，olfactoryreceptor)基因中，只選擇一個(gè)進(jìn)行表達(dá)，這種表達(dá)調(diào)控方式是產(chǎn)生嗅覺的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。經(jīng)過相關(guān)研究實(shí)驗(yàn)推測(cè)，OR的這種表達(dá)方式的調(diào)控機(jī)制包括OR的負(fù)調(diào)控作用：當(dāng)每個(gè)OSN成功表達(dá)一個(gè)有功能的OR后，此OR將抑制其它OR的表達(dá)，使OSN只表達(dá)這個(gè)OR。但在此過程中，OR具體是如何反饋抑制其他OR的表達(dá)，現(xiàn)

2、在仍不清楚。 OR蛋白進(jìn)行反饋調(diào)控的具體途徑有以下幾種可能性：1.OR結(jié)合到其它轉(zhuǎn)錄因子或上游激活因子上，使其失活或活性大大降低，以進(jìn)行反饋調(diào)控；2.OR直接或與其它轉(zhuǎn)錄因子共同作用，結(jié)合到相關(guān)的順式調(diào)控元件上，使此順式調(diào)控元件的活性受到抑制，以進(jìn)行負(fù)調(diào)控。 本實(shí)驗(yàn)旨在原核表達(dá)小鼠嗅覺受體28(MOR28)，并制備其多克隆抗體。此抗體將用于對(duì)上述OR蛋白反饋調(diào)控具體途徑的推理進(jìn)行研究。 以小鼠基因組DNA為

3、模板擴(kuò)增出小鼠嗅覺受體28基因的部分序列smor28(shortmiceolfactoryreceptor)，將其連接到pET28a(+)骨架載體上，構(gòu)建原核表達(dá)載體pMOR28。pMOR28表達(dá)載體誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況。利用Ni-NTA瓊脂糖提純表達(dá)的目的蛋白SMOR28，SMOR28經(jīng)透析除鹽，凍干濃縮后，免疫兔子制備其抗兔多克隆抗體。經(jīng)westenblotting檢測(cè)，SMOR28的抗兔多克隆抗體特異性