乳桿菌重組S-層蛋白的純化及各型FMDV表位嵌入效果的鑒定.pdf

1、口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth DiseaseVirus，F(xiàn)MDV)引起的一種偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度傳染性疾病，一旦暴發(fā)之后給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前疫苗接種是控制FMD的最重要措施之一，常用的疫苗是全病毒的滅活疫苗，滅活疫苗雖然在預(yù)防和控制FMD起著重要作用，但在疫苗應(yīng)用當(dāng)中顯出很多不足之處，如純化病毒顆粒難度大，儲(chǔ)存病毒顆粒條件苛刻，疫苗接種后免疫

2、效果不穩(wěn)定等。目前，我國(guó)流行的FMD主要以A、O和AsiaⅠ多型交替出現(xiàn)，而且FMDV各型之間幾乎無交叉免疫保護(hù)力，所以單價(jià)疫苗在免疫實(shí)踐中難以成效。
　　本研究對(duì)已經(jīng)構(gòu)建的含有抗原基因SLP和SLP-MultiVP1的原核表達(dá)載體pGEX-SLP和pGEX-SLP-MultiVP1進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)獲得含有GST標(biāo)簽蛋白的GST-SLP和GST-SLP-MultiVP1融合蛋白，利用Pierce(R) GST Spin P

3、urification Kit親和層析和氯化鋰沉淀法進(jìn)行純化并將純化結(jié)果進(jìn)行比較。采用各型FMDV如A、O和AsiaⅠ型疫苗株陽性血清在重組融合蛋白GST-SLP-MultiVP1中進(jìn)行各表位的識(shí)別，并在體外經(jīng)凝血酶切除GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)后，對(duì)SLP-MultiVP1蛋白質(zhì)再進(jìn)行表位識(shí)別試驗(yàn)。具體研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)含pGEX-SLP和pGEX-SLP-MultiVP1重組質(zhì)粒的菌液進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，重組蛋白經(jīng)SDS-PA

4、GE和Western blotting方法鑒定，證明了大小分別約為71kDa和80kDa的重組融合蛋白的存在，這與理論值相符。
　　2.利用Pierce(R) GST Spin Purification Kit親和層析法和氯化鋰沉淀的純化方法，對(duì)兩種重組融合蛋白進(jìn)行純化，獲得了純度較高的GST-SLP重組融合蛋白，但是重組融合蛋白GST-SLP-MultiVP1的純化效果不佳。
　　3.不論標(biāo)簽蛋白GST融合與否，各型FMD