基于多孔材料對嗜酸乳桿菌S-層蛋白的檢測及富集研究.pdf

1、乳酸菌是人體腸道中一種重要的益生菌，對腸道中的病菌有一定的抑制作用，可調(diào)節(jié)機體的免疫功能。S-層蛋白是存在于細(xì)胞膜或細(xì)胞壁外的一種表層蛋白，是乳酸菌定植于腸道上發(fā)揮益生作用的重要黏附因子。目前S-層蛋白的檢測方法成本較高且操作復(fù)雜，傳統(tǒng)的蛋白純化方法操作繁瑣，因此構(gòu)建對S-層蛋白的快速檢測方法及新的純化方法具有重要研究意義。本文主要基于光子晶體分子印跡和多孔硅這兩種多孔材料，構(gòu)建了S-層蛋白快速檢測及富集的光學(xué)傳感器。具體研究內(nèi)容與結(jié)果

2、如下:
　　首先用層析法純化得到S-層蛋白，以用于后續(xù)傳感材料的構(gòu)建及響應(yīng)性研究。接著采用免疫法制備了抗S-層蛋白單克隆抗體，目的是用于多孔硅生物光學(xué)傳感器的構(gòu)建。所得的S-層蛋白純度較高，S-層蛋白單克隆抗體的效價≥128K。
　　采用St(o)ber法制備單分散SiO2顆粒，通過垂直沉降自組裝法制備了SiO2膠體晶體，將光子晶體與分子印跡結(jié)合構(gòu)建了反蛋白石水凝膠響應(yīng)材料，該材料為三維有序大孔結(jié)構(gòu)，具有光譜自表達(dá)及響應(yīng)速度

3、快的特點，可實現(xiàn)對S-層蛋白的免標(biāo)記快速檢測;采用表面印跡法在水凝膠表面制備了S-層蛋白的印跡空穴，該印跡空穴與S-層蛋白形狀大小互補，對S-層蛋白具有高度選擇性及高靈敏度，對不同濃度的S-層蛋白的響應(yīng)性呈現(xiàn)良好的線性結(jié)果，可實現(xiàn)對表層蛋白粗提液中S-層蛋白含量的檢測，響應(yīng)時間在3min內(nèi)。此外該材料對嗜酸乳桿菌表層蛋白粗提液中的S-層蛋白有一定富集作用，有望實現(xiàn)對S-層蛋白的純化。
　　將多孔硅與抗原-抗體反應(yīng)結(jié)合制備了對S-層

4、蛋白在線檢測的傳感器。采用單晶硅通過陽極氧化法制備了單層膜多孔硅，并用二氧化鈦修飾其表面以增加其穩(wěn)定性，所得多孔硅具有良好的反射干涉性能。將多孔硅與微流控技術(shù)結(jié)合，實現(xiàn)了對檢測樣品的在線實時監(jiān)測，該傳感器對S-層蛋白具有高度選擇性和靈敏度，對不同濃度的S-層蛋白的響應(yīng)性呈現(xiàn)良好的線性結(jié)果，可實現(xiàn)對未知濃度S-層蛋白含量的測定，響應(yīng)時間為5min左右。
　　綜上所述，研究得到了反蛋白分子印跡水凝膠和多孔硅生物光學(xué)傳感器，這兩種材料均