Bt cry3Aa基因表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甘薯莖段遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、甘薯（Ipomoea batatas Lam.）是世界上重要的農(nóng)作物和工業(yè)作物，又兼具抗癌、保健的功效，因此在全世界廣泛種植。甘薯害蟲種類多樣，危害方式不盡相同，每年因害蟲造成甘薯減產(chǎn)給國(guó)家?guī)?lái)的損失無(wú)法估計(jì)。而常規(guī)的甘薯品種缺乏對(duì)田間害蟲的天然抗性，依靠常規(guī)育種手段也難以解決上述問(wèn)題。目前控制甘薯害蟲的手段多以化學(xué)殺蟲劑為主，既提高了生產(chǎn)成本又對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染，并且化學(xué)物質(zhì)的殘留會(huì)對(duì)食用者造成安全隱患。因此，亟需發(fā)現(xiàn)并利用一種新型的手段

2、來(lái)培育甘薯抗蟲新品種。Bt基因被認(rèn)為是一種針對(duì)害蟲有特異性殺蟲活性，而對(duì)人、畜等非目標(biāo)生物無(wú)害的抗蟲基因，因其優(yōu)良的特性，目前在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用。Bt cry3Aa基因?qū)η食崮坷ハx有專一殺滅活性，將該基因?qū)氲礁适碇?，培育并獲得轉(zhuǎn)基因甘薯可以對(duì)鞘翅目害蟲甘薯小象甲產(chǎn)生一定抵抗作用，以達(dá)到抗蟲并增加甘薯產(chǎn)量的目標(biāo)。
　　本研究的主要結(jié)果是:
　　1.Bt cry3Aa基因序列的上游5'端引入了KpnⅠ、BamHⅠ限制性內(nèi)切酶

3、酶切位點(diǎn)和PTD接頭，在下游3'端引入了SalⅠ酶切位點(diǎn)，且利用甘薯密碼子偏好性對(duì)cry3Aa進(jìn)行改造后于公司合成。
　　2.合成后的基因經(jīng)酶切、連接、轉(zhuǎn)化等步驟最終獲得雙元表達(dá)載體pCAMBIA1301-cry3Aa與pCAMBIA1301-PTD-cry3Aa。
　　3.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的不經(jīng)植物組織培養(yǎng)階段的甘薯遺傳轉(zhuǎn)化體系的探索，初步建立了一種適合廣薯87號(hào)甘薯品種的轉(zhuǎn)化策略，在菌液OD600=0.4，侵染時(shí)間10mi