25877.黑青斑河鲀干擾素γ及其受體的克隆鑒定和配體重組蛋白活性研究

1、中山大學(xué)博士后研究工作報(bào)告】Sf627l黑青斑河純干擾素Y及其受體的克隆鑒定和配體重組蛋白活性研究IdentificationofIFN丫anditsreceptorinTetraodonnigriviridisandthebioactivityofrecombinantiigandprotein博士后姓名盧丹琪流動(dòng)站(一級(jí)學(xué)科)名稱生物學(xué)專業(yè)(級(jí)學(xué)科)名稱水生生物學(xué)合作導(dǎo)師林浩然院士、何建國(guó)教授研究工作起始時(shí)間2008年7月2日研究工

2、作期滿時(shí)間2010年7月1日中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中國(guó)，廣州，510275二。一。年七月IFN是唯一的II型干擾素，它作為宿主受感染前期分泌的“危險(xiǎn)”信號(hào)分子，能快速警告鄰近的細(xì)胞和先天性免疫的效應(yīng)細(xì)胞，參與到先天性和獲得性免疫反應(yīng)的起始階段。本報(bào)告通過比較基因組學(xué)方法結(jié)合分子生物學(xué)手段，首次從黑青斑河純中克隆得到兩種干擾素丫(IFNy)和及其受體結(jié)合亞基(IFNGRl)兩種●亞型的開放讀碼框序列；通過生物信息學(xué)軟件分析，了解黑青斑河純I

3、FN)及IFNGRI與其他脊椎動(dòng)物同源基因的結(jié)構(gòu)異同及進(jìn)化關(guān)系：使用半定量RTPCR技術(shù)分析IFN／和IFNGRI在黑青斑河鮑魚體各組織的表達(dá)情況；使用原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)和純化了黑青斑河純兩種IFN)重組蛋白，并利用Western雜交鑒定得到的蛋白；最后，使用黑青斑河純兩種IFNT重組蛋白離體孵育免疫細(xì)胞，檢測(cè)重組IFN7蛋白對(duì)頭腎細(xì)胞下游基因表達(dá)量的影響。主要研究結(jié)果如下：1本研究克隆的黑青斑河純兩種IFNy(In唧1和IFNy2

4、)和兩種IFNGRI(IFNGRl1和IFNGRl2)OI沖序列及其所推導(dǎo)的氨基酸序列具有與其他物種同源基因具有相似的長(zhǎng)度和分子量。黑青斑河純兩種In與其他魚類IFN)相似，都具有N端信號(hào)肽序列和C端IFN)家族標(biāo)識(shí)序列。此外，IFN72C端帶有類似哺乳動(dòng)物IFNy的核定位序列。黑青斑河純IFN7受體結(jié)合亞基IFNGRl兩種亞型則均為單次跨膜受體，在胞外區(qū)有多個(gè)保守的半胱氨酸殘基，胞內(nèi)區(qū)有JAKl結(jié)合位點(diǎn)和STATI停泊位點(diǎn)。與其他脊椎

5、動(dòng)物IFNy及IFNGRl氨基酸序列同源性分析和進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，黑青斑河純IFN7和IFNGRl與紅鰭東方鰱同源基因親緣關(guān)系最近，與哺乳動(dòng)物進(jìn)化關(guān)系最遠(yuǎn)。RTPCR分析黑青斑河純兩種IFNT和兩種IFNGRl基因在魚體各組織的表達(dá)模式，結(jié)果顯示兩種In唧表達(dá)模式差異較大，兩種IFNGRl表達(dá)模式差異較小。2本研究構(gòu)建了黑青斑河純IFN)I和IFNlt2成熟肽的原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化并得到重組表達(dá)工程菌株，通過對(duì)誘導(dǎo)的時(shí)間、溫度和IPTG濃度