多種新型抗BLyS重組蛋白活性的研究.pdf

1、BLyS，B淋巴細(xì)胞刺激因子，又叫做BAFF，是腫瘤壞死因子（TNF）超家族的成員之一，在B淋巴細(xì)胞的增殖、成熟、維持 B細(xì)胞生理功能中起重要的作用。BLyS是通過和其三個(gè)受體 BCMA、TACI、BR3相互作用而發(fā)揮其生物學(xué)功能的。研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體中BLyS過量表達(dá)可引起諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，綜合干燥征等疾病的發(fā)生。多種BLyS拮抗劑肽被用于治療小鼠及人類自身性免疫疾病的研究，并取得良好的效果。之前，我們通過計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)了多

2、種的B LyS拮抗肽如BC、BA、TA和TC等，結(jié)果表明：這些肽可以很好的抑制BLyS與TACI-Fc或BCMA-Fc的結(jié)合；814是通過噬菌體庫篩選得到的另一種與BLyS有很好親和力拮抗肽。為了保持肽的穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)中，我們利用基因工程技術(shù)將拮抗肽與人IgG1的Fc片段結(jié)合組成重組質(zhì)粒，利用原核表達(dá)系統(tǒng)獲得多種新型抗BLyS融合蛋白，并用ELIS A的方法對其活性做了進(jìn)一步研究。具體研究結(jié)果如下：
　　1構(gòu)建并純化了BCMA-F

3、c-Myc融合蛋白，競爭性ELISA結(jié)果表明, BCMA-Fc對BCMA-Fc-Myc和BLyS的結(jié)合抑制率到達(dá)80％。建立肽-Fc融合蛋白競爭性抑制BCMA-Fc和BlyS結(jié)合能力的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
　　2構(gòu)建并獲得了無關(guān)肽（NP）與Fc融合蛋白表達(dá)載體(pET30a-NP-Fc)以及pET30a-BP-Fc、pET30a-BA-Fc、pET28a-3-BP-Fc和pET28a-3-814-Fc融合蛋白。
　　3利用間接性ELI