抗BLyS單鏈抗體的構(gòu)建、純化和初步活性鑒定.pdf

1、B淋巴細(xì)胞刺激因子（B lymphocyte stilulator，BLyS）是一種主要由巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤壞死因子，廣泛參與了機(jī)體免疫，對外周B淋巴細(xì)胞的生存、成熟和分化，生發(fā)中心的形成，漿細(xì)胞抗體的分泌等生命過程有著至關(guān)重要的作用。BLyS的不正常表達(dá)與人類多種疾病相關(guān)，如免疫缺陷病，自身免疫性疾病和B細(xì)胞淋巴瘤等。研究表明自身免疫性疾病和血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者體內(nèi)的BLyS水平明顯升高，而且BLyS信號的阻斷對此類疾病的

2、發(fā)展有顯著的治療作用。單鏈抗體（ScFv）既具備抗原結(jié)合得特異性，又具有分子量小、穿透力強(qiáng)免疫原性低的特點(diǎn)，在免疫學(xué)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。因此抗BLyS單鏈抗體具有治療自身免疫性疾病和B淋巴瘤的潛在作用。
　　本課題研究方法：運(yùn)用計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)設(shè)計(jì)抗BLyS單鏈抗體的基因序列（VHL和MHL），用重疊PCR等方法構(gòu)建重組質(zhì)粒，借助原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化目的蛋白，通過ELISA技術(shù)初步檢測抗體的活性。
　　主要研究

3、成果：
　　（一）擴(kuò)增了兩種抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)，并用重疊PCR方法構(gòu)建了兩種單鏈抗體基因片段，并且分別添加了Myc標(biāo)簽和Fc標(biāo)簽，VHL-Myc大小為780bp，MHL-Fc大小為1500bp。
　?。ǘ?gòu)建了VHL-Myc-pET28a和MHL-Fc-pET28a表達(dá)載體，對蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)條件進(jìn)行了優(yōu)化，獲得了較高水平的表達(dá)。蛋白大量表達(dá)后利用Ni親和柱從包涵體中純化出兩種目的蛋白。
　?。ㄈw外活性檢測結(jié)果