24612.胰島素陽性及陰性細胞雙標記系統(tǒng)的構建

1、汕頭大學碩士學位論文題目：目：胰島素陽性及陰性細胞雙標記系統(tǒng)的構建胰島素陽性及陰性細胞雙標記系統(tǒng)的構建英文題目：英文題目：Generationofaduallabelingsystemfinsulinpositivenegativecells姓名：范文竹學號：10808066學院：理學院導師：魏熾炬教授專業(yè)：生物化學與分子生物學入學日期：2008年9月答辯日期：2011年5月汕頭大學碩士學位論文I摘要細胞標記與追蹤是研究胰腺發(fā)育與再生的

2、一種重要手段。傳統(tǒng)的CreloxP細胞標記系統(tǒng)需要兩個質粒，其中一個用于組織特異性表達重組酶Cre，另一個用于組成型表達報告基因，但該系統(tǒng)目前只能用于單一種類細胞的標記。為進一步改善細胞標記技術，實現(xiàn)對胰島素陽性、陰性細胞的雙標記，本研究設計了一種新的單載體系統(tǒng)，該載體利用大鼠胰島素啟動子（RIP）控制重組酶Cre的表達，利用組成型CMV強啟動子控制另一個重組酶Flp、內部核糖體進入位點（IRES）、紅色熒光蛋白基因（DsRed）、及綠

3、色熒光蛋白基因（EGFP）的表達。同時，在重組酶Cre及Flp的編碼區(qū)內部各插入一個內含子，以消除質粒制備過程中外源基因的非特異性表達，從而使胰島素陽性、陰性細胞分別被標記為綠色和紅色。在該載體的構建過程中我們發(fā)現(xiàn)，由于Cre酶的放大作用，RIP的組織特異性顯著降低。為提高RIP的組織特異性，本研究探討了加快Cre在細胞內的分解速度，降低Cre在細胞中的表達量，或減弱Cre的酶活性等途徑。研究結果表明，Cre基因173位精氨酸突變?yōu)榻M氨