三種中國(guó)地方畜禽成纖維細(xì)胞庫(kù)構(gòu)建及北京油雞GPAT基因的克隆和序列分析.pdf

1、該論文以北京油雞、狼山雞、小尾寒羊?yàn)檠芯繉?duì)象,采用組織塊貼壁培養(yǎng)法和細(xì)胞冷凍技術(shù)構(gòu)建成纖維細(xì)胞庫(kù),采用生長(zhǎng)曲線、染色體分析、同工酶分析等方法對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)、遺傳穩(wěn)定性、種間交叉污染等進(jìn)行檢測(cè);采用基因克隆技術(shù)和相關(guān)分析軟件對(duì)北京油雞GPAT基因進(jìn)行克隆和序列分析.旨在細(xì)胞水平上保存該三種畜禽品種遺傳資源,為在基因水平上保存北京油雞特異性狀奠定基礎(chǔ),為其他畜禽品種資源保存提供借鑒.試驗(yàn)結(jié)果如下:1所培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)為長(zhǎng)梭形或不規(guī)則三角形,生

2、長(zhǎng)時(shí)呈火焰狀或旋渦狀走勢(shì).2北京油雞、狼山雞、小尾寒羊細(xì)胞凍存前活率分別為97.5%、96.0%和97.0%;復(fù)蘇后的活率分別為95.0%、94.5%、94.7%.3該成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈典型的"S"型,第2天起細(xì)胞倍增時(shí)間約為24h,第5天起細(xì)胞生長(zhǎng)漸緩.4染色體分析結(jié)果表明,北京油雞、狼山雞、小尾寒羊成纖維細(xì)胞均以二倍體為主,二倍體染色體數(shù)目分別占所觀察數(shù)目的87.1%、86.7%和93.4%;染色體結(jié)構(gòu)變異率分別為1.5%、0.8

3、%和1.4%;染色體形態(tài)與前人報(bào)道的其他品種相比略有不同.5 LDH同工酶譜帶分析表明,北京油雞、狼山雞成纖維細(xì)胞為兩條譜帶,小尾寒羊?yàn)?條譜帶;MDH同工酶譜帶分析三種品種均為兩條譜帶,但小尾寒羊的遷移率明顯高于北京油雞、狼山雞.6微生物污染檢測(cè)顯示,所培養(yǎng)的三種畜禽品種的成纖維細(xì)胞均呈陰性.7脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒pEGFP-N<,3>分別轉(zhuǎn)染三種品種的成纖維細(xì)胞,10h后均可獲得較好的轉(zhuǎn)染效果.8北京油雞GPAT基因克隆和序列分析結(jié)果顯示

4、:該基因長(zhǎng)度為953bp,其中含288A,177C,272T,216G,(A+T)%為58.76%,(G+C)%為41.24%;與已發(fā)表的雞的GPAT相比其同源性為84.63%,堿基變異率為15.37%,在365 bp處的左翼有5個(gè)堿基插入,在423-429bp處有5個(gè)堿基缺失,在631處有1個(gè)堿基缺失;與人的該基因序列相比,其同源性為81.41%,北京油雞該序列在243bp和326bp處各有3個(gè)和2個(gè)堿基缺失;與小鼠的該基因序列相比,