原代成體皮膚角質(zhì)形成細胞、成纖維細胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、目的:皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的難點是修復(fù)細胞的快速增殖分化、生長因子的持續(xù)有序作用和細胞外基質(zhì)支架的構(gòu)建.依據(jù)現(xiàn)代分子生物學(xué)和組織工程學(xué)的研究進展,首先在體外克隆及構(gòu)建帶信號肽的人表皮生長因子基因和人血管內(nèi)皮生長因子基因真核表達質(zhì)粒,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將人表皮生長因子基因?qū)朐x體成人角質(zhì)形成細胞,將血管內(nèi)皮細胞生長因子基因?qū)朐x體成人皮膚成纖維細胞,分別證實轉(zhuǎn)基因細胞表達和分泌hEGF和hVEGF的能力,以達到為皮膚創(chuàng)傷原位修復(fù)和人工皮膚構(gòu)建

2、研究中修復(fù)細胞快速增殖、生長因子穩(wěn)定有序表達目的.結(jié)論:1、成功構(gòu)建了帶信號肽的hEGF和hVEGF121基因的真核表達質(zhì)粒;2、成人皮膚成纖維細胞和角質(zhì)形成細胞在體外培養(yǎng)可快速穩(wěn)定增殖,細胞生物學(xué)特性無明顯改變;3、真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/hEGF在脂質(zhì)體介導(dǎo)下可成功轉(zhuǎn)染成人角質(zhì)形成細胞,獲得的轉(zhuǎn)基因角質(zhì)形成細胞表達分泌較高濃度具生物學(xué)活性的hEGF;4、真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/hVEGF121在脂質(zhì)體介導(dǎo)下可