調節(jié)角質形成細胞中的Notch信號對成纖維細胞活性的影響.pdf

1、目的:
　　探討在復合培養(yǎng)的條件下,通過調節(jié)角質形成細胞中的Notch信號,了解其對成纖維細胞增殖能力、以及分泌細胞外基質和細胞因子的影響。
　　方法:
　　在誘導角質形成細胞終末分化的過程中,用Jagged-1或者γ-分泌酶抑制劑DAPT進行預處理,調控角質形成細胞中的Notch信號,然后通過血清刺刺激和提升至氣液交界面使其達到復層生長和終末分化,后與成纖維細胞共培養(yǎng)。首先,在復合培養(yǎng)前,即誘導角質形成細胞分化的過程

2、中,通過real-timePCR檢測Notch信號受體Notc-1、相應配體Jagged-1、下游調控基因p21和p63的表達,明確Notch信號是否活化。其次,通過將調節(jié)Notch信號后的角質形成細胞與成纖維細胞復合培養(yǎng),細胞計數(shù)檢測成纖維細胞增殖能力、real-timePCR和ELISA分別從mRNA和蛋白質水平檢測成纖維細胞合成和分泌的Collagen-1、Fibronectin、KGF和細胞因子的表達。
　　結果:

3、　　用Fc段和DMSO分別對角質形成細胞進行預處理,檢測其Notch信號下游分子p21和p63的表達,與Blank組相比,均未見明顯異常(P>0.05)。而用Jagged-1對角質形成細胞進行預處理,檢測p21和p63、以及Notch信號受體Notch-1和相應配體Jagged-1在角質形成細胞中的表達,均發(fā)現(xiàn)Notch信號明顯活化。用DAPT對角質形成細胞進行預處理,結果表明:相對于Blank組,DAPT組角質形成細胞中Notch信號

4、受到抑制。分別對復合培養(yǎng)后第1天、第3天和第5天的成纖維細胞進行檢測,發(fā)現(xiàn)Notch信號活化的Jagged-1組的角質形成細胞能夠明顯促進與其共培養(yǎng)的成纖維細胞的增殖、分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF、以及TGF-β1的合成(P<0.05)。而在Notch信號被抑制的DAPT組,成纖維細胞的增殖能力與Blank組對比雖無明顯差別(P>0.05),但其分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF