綠原酸抗人皮膚成纖維細胞衰老的研究.pdf

1、目的：利用乙二醛建立人皮膚成纖維細胞衰老模型，探討綠原酸在乙二醛致人皮膚成纖維細胞衰老中的保護作用。
　　方法：(一)取幼兒包皮組織進行人皮膚成纖維細胞的原代培養(yǎng)，并采用免疫組化的方法以進一步證實。
　?。ǘ┯肕TT法、β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法和實時定量PCR（qRT-PCR）法評價乙二醛及氨基胍對人皮膚成纖維細胞增殖、SA-β-gal陽性率及p16INK4a mRNA表達量的影響。
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2、濃度的綠原酸與乙二醛一起作用于人皮膚成纖維細胞，采用MTT法初步篩選綠原酸適合作用的濃度，然后再檢測綠原酸加入后SA-β-gal染色陽性率和p6INK4a mRNA的表達情況。
　　結(jié)果：(一)培養(yǎng)出人皮膚成纖維細胞，且免疫組化染色結(jié)果顯示波形蛋白為陽性，而第八因子相關(guān)抗原及細胞角蛋白19為陰性；
　?。ǘ┰诩尤胍叶┖螅似つw成纖維細胞的增殖能力下降，SA-β-gal陽性率和p16INK4a mRNA表達量明顯升高，與陰

3、性對照組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)；當(dāng)氨基胍與乙二醛一起作用于成纖維細胞時，細胞增殖能力升高，SA-β-gal陽性率及p16INK4a mRNA表達量明顯下降，與乙二醛組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01），與陰性對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；
　?。ㄈ┘尤刖G原酸及乙二醛一起作用于細胞，發(fā)現(xiàn)乙二醛對成纖維細胞增殖能力的抑制作用下降，SA-β-gal染色陽性率和p16INK4a mRNA呈劑量依賴性減少的改變,與乙二醛組比