蘆薈凝膠對人皮膚成纖維細胞增殖及膠原合成的影響.pdf

1、目的：蘆薈凝膠(Aloe gel，AG)是蘆薈(Aloe)中重要的化學(xué)成分，其中含99％～99.5％的PH為4～5的天然水份，固體成分主要為糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、纖維素等。蘆薈凝膠應(yīng)用十分廣泛，有報道蘆薈凝膠可以應(yīng)用于多種疾病的治療，如：關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、痤瘡、皮炎、燒傷和消化性潰瘍等。人皮膚成纖維細胞(human skin fibroblast，HSFb)是真皮主體細胞成分，大量的研究顯示人皮成纖維細胞的異常生物學(xué)改變與皮膚衰老及皺紋形成

2、有密切的關(guān)系。 本研究擬以人皮膚成纖維細胞為研究對象，施加不同濃度的蘆薈凝膠，觀察蘆薈凝膠對人皮膚成纖維細胞的增殖活性及膠原蛋白合成的影響。 方法：膠原酶消化法原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，應(yīng)用單層成纖維細胞傳代培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)獲得人皮膚成纖維細胞后，將蘆薈凝膠加入到培養(yǎng)液中并作用于人皮膚成纖維細胞，實驗分空白對照組和實驗組，空白對照組僅加入培養(yǎng)液，實驗組分別加入濃度為5％、10％、15％、20％的含蘆薈凝膠DMEM培養(yǎng)液，同時

3、實驗設(shè)不同時相組，于蘆薈凝膠作用后24h、48h、72h后進行檢測。具體檢測內(nèi)容： 1．光鏡觀察人皮膚成纖維細胞形態(tài)。 2．四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測成纖維細胞增殖程度。 3．應(yīng)用流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期的變化。 4．堿水解法檢測細胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量。 5．免疫組化法檢測蘆薈凝膠對人皮膚成纖維細胞Ⅰ型前膠原表達的影響。 結(jié)果： 1．光鏡觀察顯示5％，10％，15

4、％蘆薈凝膠作用后，與空白對照組相比，成纖維細胞無明顯改變，而20％蘆薈凝膠作用后成纖維細胞出現(xiàn)了增殖抑制現(xiàn)象。 2．MTT比色法結(jié)果顯示5％、10％、15％蘆薈凝膠均對成纖維細胞有增殖促進作用，而20％蘆薈凝膠表現(xiàn)出成纖維細胞增殖抑制。 3．細胞周期時項分析結(jié)果顯示量效組經(jīng)5％、10％濃度蘆薈凝膠處理后細胞周期G0/G1期細胞百分率較對照組低(P<0.05)，S+G2/M期細胞百分率及增殖指數(shù)PI值較對照組增高(P<0.

5、05)，濃度為15％的蘆薈凝膠培養(yǎng)液處理組成纖維細胞的G0/G1期和S+G2/M期細胞百分率與對照組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。各蘆薈凝膠組之間比較濃度為10％的蘆薈凝膠培養(yǎng)液組PI值較其他蘆薈組增高(P<0.05)，S+G2/M期細胞百分率較對照組明顯增高(P<0.05)。時效組檢測結(jié)果顯示在不同時間點檢測的細胞周期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 4．各濃度蘆薈凝膠組在不同時間段時其成纖維細胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸

6、含量明顯高于空白對照組(P<0.05)，各濃度蘆薈組之間比較得出10％蘆薈組較5％、15％蘆薈組更能增加成纖維細胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量(P<0.05)。各蘆薈組72h與24h的羥脯氨酸含量相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 5．經(jīng)10％濃度蘆薈凝膠處理后的成纖維細胞Ⅰ型前膠原表達較空白對照組增加(P<0.05)。 結(jié)論： 1．光鏡觀察和MTT比色法結(jié)果顯示適宜濃度的蘆薈凝膠能很好的促進成纖維細胞的增殖。

7、 2．通過流式細胞儀測定細胞周期分布證實一定濃度的蘆薈凝膠作用后的人皮膚成纖維細胞的G0/G1期細胞所占百分率下降，S+G2/M期細胞所占百分率及PI值明顯增高，推測其可能作用機制是促使靜止態(tài)的G0/G1期細胞活躍而向S+G2/M期轉(zhuǎn)變，使DNA合成量增加，從而促進細胞的增殖。 3．適宜濃度的蘆薈凝膠能增加培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量且在作用后72h達最高水平，免疫組化法顯示經(jīng)蘆薈凝膠作用后人皮膚成纖維細胞Ⅰ型前膠原表達也增加。說明