補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞增殖周期影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方藥對(duì)體外培養(yǎng)的衰老人皮膚成纖維細(xì)胞（HSF）的增殖作用；觀察不同濃度補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方含藥血清作用衰老的HSF后的增殖作用；探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1細(xì)胞培養(yǎng)：購(gòu)買(mǎi)人皮膚成纖維細(xì)胞株，體外培養(yǎng)傳代至人皮膚成纖維細(xì)胞老化。
　　2含藥血清的制備：將健康清潔級(jí)雄性 SD大鼠60只，隨機(jī)分為3組，即補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)低劑量組、補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)中劑量組、補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)高劑量組，每組20只。各組大鼠分別采取灌胃給藥法灌入不同

2、濃度的藥液，按照通法采血，分離、滅活血清，分別配制含10％各血清的DMEM完全培養(yǎng)液。
　　3人皮膚二倍體成纖維細(xì)胞的分組：年輕對(duì)照組，老齡對(duì)照組，補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)高、中、低劑量組，并加入相應(yīng)的血清進(jìn)行干預(yù)處理。
　　4細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)檢測(cè)：通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)并繪制細(xì)胞增殖生長(zhǎng)曲線圖。觀察各組 HSF細(xì)胞數(shù)量的變化。
　　5細(xì)胞周期測(cè)定：用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。
　　6細(xì)胞免疫化學(xué)檢測(cè)：采用細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)各組細(xì)胞的P

3、CNA、c-Fos、c-Myc蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1 HSF生長(zhǎng)曲線中，相同時(shí)間內(nèi)，各組細(xì)胞數(shù)由高到低分別是補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)高、中、低劑量組，年輕對(duì)照組，老齡對(duì)照組。
　　2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，各組細(xì)胞中S期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由高到低分別是補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)高、中、低劑量組，年輕對(duì)照組，老齡對(duì)照組。
　　3細(xì)胞免疫化學(xué)檢測(cè)：年輕對(duì)照組和老齡對(duì)照組的OD值相比有顯著性差異（P<0.05），表明 HSF已經(jīng)老化，進(jìn)而進(jìn)一步說(shuō)明正常

4、人皮膚二倍體細(xì)胞經(jīng)歷一定次數(shù)的細(xì)胞分裂后，最終進(jìn)入非增殖狀態(tài)，稱(chēng)之為細(xì)胞衰老；補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)各劑量組與老齡對(duì)照組的OD值相比（P<0.05），與年輕對(duì)照組的OD值相比（P<0.05），均有顯著性差異，說(shuō)明補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方藥促進(jìn)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞增殖；補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)中劑量與組補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)低劑量組的OD值相比（P<0.05），補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)高劑量組與補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)中、低劑量組的OD值相比（P<0.05），均有顯著性差異，說(shuō)明補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方高、中、低濃度間有顯著性差異（P<0.