卡托普利對幼鼠心臟成纖維細(xì)胞衰老的影響.pdf

1、目的：心臟成纖維細(xì)胞(Cardiacfibroblasts，CFs)占心臟間質(zhì)細(xì)胞的90％以上，在心臟的正常生長和病理重塑中起重要作用。心臟成纖維細(xì)胞的異常增殖促進(jìn)心室重塑的發(fā)展，加速心衰的進(jìn)程。因此，應(yīng)用藥物，抑制CFs的增殖，加速CFs的衰老，將會減緩心肌纖維化的進(jìn)程?？ㄍ衅绽R床應(yīng)用廣泛，目前已有研究證明，卡托普利(captopril,Cap)可以延緩心肌纖維化，改善心室重塑，阻止心力衰竭的進(jìn)展。但其分子機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)擬在細(xì)

2、胞水平，觀察卡托普利對幼鼠心臟成纖維細(xì)胞衰老的影響，明確卡托普利是否會加速CFs的衰老，在細(xì)胞水平明確卡托普利延緩心肌纖維化，改善心室重塑的機(jī)制。 方法：原代培養(yǎng)SD大鼠幼鼠心臟成纖維細(xì)胞。經(jīng)3次傳代后，已純化為心臟成纖維細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)選用4-7代細(xì)胞。分別以1mg/l、5mg/l及10mg/l卡托普利作用于CFs72h。然后使用流式熒光原位雜交法(Flow-Fish)檢測CFs端粒長度的變化；進(jìn)行衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶(SA-β

3、-gal)染色；以流式細(xì)胞儀檢測CFs細(xì)胞周期的情況；電鏡下觀察各組CFs線粒體損傷情況。以10g/LD-gal作用于CFs72h，建立CFs衰老模型，以1mg/l卡托普利作用于該模型，F(xiàn)low-Fish法檢測CFs端粒長度的變化，以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的情況。 結(jié)果：1.5mg/l及10mg/l卡托普利均可以導(dǎo)致心臟成纖維細(xì)胞端粒的縮短，且隨著卡托普利濃度的增加，細(xì)胞端粒的縮短更為明顯(P＜0.001)。1mg/l卡托普利組

4、與對照組比較端粒長度無明顯變化(P=0.882)。 2.5mg/l，及10mg/l卡托普利組出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)藍(lán)染顆粒的堆積，SA-β-gal染色陽性。1mg/l組細(xì)胞與對照組，其SA-β-gal染色陰性。 3.5mg/l及10mg/l卡托普利組細(xì)胞周期G1期比例較對照組及1mg/l組明顯升高(P＜0.001)。 4.電鏡下觀察5mg/l及10mg/l卡托普利處理后心臟成纖維細(xì)胞線粒體部分嵴消失，形成髓鞘樣結(jié)構(gòu)。線粒體損

5、傷明顯，且10mg/l組較5mg/l組線粒體損傷重。1mg/l卡托普利對心臟成纖維細(xì)胞線粒體無明顯影響。 5.建立幼鼠CFs衰老模型：以10g/lD-gal作用心臟成纖維細(xì)胞72小時(shí)后，流式熒光原位雜交法(Flow-Fish)檢測端粒長度，較對照組端粒長度明顯縮短(P＜0.001)；衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶染色陽性明顯；電鏡下觀察心臟成纖維細(xì)胞線粒體部分嵴消失，形成髓鞘樣結(jié)構(gòu)。細(xì)胞總SOD活性較對照組降低、MDA含量增加(P＜0

6、.001)。 6.1mg/l卡托普利+10g/LD-gal培養(yǎng)心臟成纖維細(xì)胞72小時(shí)，F(xiàn)low-Fish法檢測端粒長度，與10g/lD-gal組比較明顯縮短(P＜0.001)；細(xì)胞周期G1期比例較10g/LD-gal組比例有所下降(P＜0.001)。 結(jié)論：1.5mg/l及10mg/l卡托普利可以顯著的縮短CFs端粒的長度，影響心臟成纖維細(xì)胞周期，導(dǎo)致CFsSA-β-gal染色陽性，及細(xì)胞線粒體損傷。引起CFs衰老的發(fā)生