維生素E對UVA誘導(dǎo)人皮膚成纖維細胞光損傷的防護作用.pdf

1、日光中的長波紫外線(Ultraviolet A,UVA)是導(dǎo)致皮膚發(fā)生光老化的重要因素。UVA照射皮膚細胞后，經(jīng)細胞中的色基(chromophore)如卟啉、黑色素、蝶呤、黃素等吸收，再通過復(fù)雜的生物化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)。ROS可對細胞內(nèi)的生物大分子如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等造成嚴(yán)重損傷，同時還能破壞細胞中一系列抗氧化防御系統(tǒng)，最終導(dǎo)致光損傷。ROS也能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶(mat

2、rix metalloproteinase,MMPs)的高表達，進而促進其對細胞外基質(zhì)中的膠原和彈性蛋白等成分的降解，導(dǎo)致皮膚失去彈性和韌性，最終使皮膚發(fā)生光老化。UVA照射細胞后會產(chǎn)生氧化應(yīng)激(oxidative stress)，氧化應(yīng)激是機體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)的平衡發(fā)生紊亂所引起的損傷效應(yīng)，它能誘導(dǎo)體內(nèi)抗氧化酶如血紅素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)的表達。已發(fā)現(xiàn)HO-1在多種組織或器官中可能保護細胞免受氧化損

3、傷。許多研究者通過抗氧化劑消除ROS以減輕UVA照射對皮膚的氧化損傷進而防止皮膚光老化作用，并發(fā)現(xiàn)部分抗氧化劑能通過Nrf2/ARE途徑誘導(dǎo)HO-1表達，從而對細胞起保護作用。在我們使用的人皮膚成纖維細胞FEK4中，HO-1能否對UVA照射誘導(dǎo)的MMPs產(chǎn)生影響，對細胞發(fā)揮一定的保護作用尚不清楚。因此，本研究在上述假設(shè)的基礎(chǔ)上，首先建立UVA氧化損傷人皮膚FEK4細胞模型，探討維生素E對皮膚UVA氧化損傷的防護作用。并初步探討維生素E對

4、UVA誘導(dǎo)MMPs產(chǎn)生的影響，進一步探討HO-1與MMPs之間的相互作用。
　　本課題主要采用以下幾種方法進行研究：MTS方法檢測FEK4細胞的增殖活性，鬼筆環(huán)肽(FITC)染色法觀察FEK4細胞的骨架形態(tài)，熒光探針DHE染色法檢測細胞內(nèi)ROS水平，Western blotting電泳法檢測細胞內(nèi)ColI、HO-1蛋白的表達，半定量RT-PCR檢測細胞內(nèi)MMP-1、MMP-2、MMP-3、ColI、ColIII、HO-1mRNA表

5、達的變化。
　　實驗結(jié)果：
　?、賃VA照射能引起FEK4細胞發(fā)生損傷，其損傷程度隨UVA照射劑量的加大而增強。
　　②維生素E對生理劑量250kJ/m2UVA照射引起的光損傷具有一定的防護作用，維生素E預(yù)處理能減輕UVA對FEK4細胞增殖活性的損傷，降低UVA照射后細胞內(nèi)ROS水平，保護細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高UVA照射后細胞內(nèi)ColI、ColIII的表達，降低UVA誘導(dǎo)的MMP-1、MMP-2、HO-1表達；但是與之相