UVA輻射對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的過(guò)氧化損傷及EGCG的保護(hù)作用.pdf

1、人的皮膚，和所有其他器官一樣，隨著年齡的增長(zhǎng)不斷發(fā)生老化。由于皮膚是機(jī)體與外界環(huán)境直接接觸的器官，因此也經(jīng)歷著紫外線照射引起的皮膚的光老化現(xiàn)象。光老化皮膚很多的功能隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸降低，并且由于皮膚發(fā)生氧化損傷，皮膚細(xì)胞中抗氧化酶的活性和非酶抗氧化劑的含量也隨著年齡的增長(zhǎng)不斷下降。
　　UVA可以通過(guò)誘導(dǎo)生成活性氧ROS（主要包括超氧陰離子、過(guò)氧化氫、和單線態(tài)氧）間接損傷DNA。ROS不但損害細(xì)胞DNA，還可參與脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧

2、化損傷，如膠原蛋白的降解。由UVA輻射引起的誘變還可能涉及反式尿酸的產(chǎn)生和基因表達(dá)的變化。
　　皮膚生物學(xué)的最新研究進(jìn)展已經(jīng)闡明了光老化的發(fā)生機(jī)制，并提出了許多新的治療方法以預(yù)防和改變?cè)撨M(jìn)程。綠茶中的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)是有效的抗氧化劑，目前已經(jīng)見于眾多的護(hù)膚品中。
　　本研究用EGCG孵育人皮膚成纖維細(xì)胞，然后進(jìn)行UVA照射，目的是通過(guò)測(cè)試氧化損傷的指標(biāo)，探討EGCG在皮膚光老化過(guò)程中的功能。同時(shí)還研究了E

3、GCG對(duì)VEGF、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原基因表達(dá)的影響，以觀察EGCG對(duì)暴露在紫外線下的人體皮膚成纖維細(xì)胞的作用。
　　以長(zhǎng)波紫外線(UVA)輻射人皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)建立光老化模型，在此基礎(chǔ)上給予EGCG干預(yù)，探討EGCG對(duì)UVA輻射條件下人皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)的保護(hù)作用及其可能的保護(hù)機(jī)制。將人皮膚成纖維細(xì)胞株接種于100 mm培養(yǎng)皿或96孔培養(yǎng)板中，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，于37℃、5％ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行

4、培養(yǎng)。將培養(yǎng)皿中的細(xì)胞隨機(jī)分為3組：對(duì)照組，UVA組和UVA+EGCG組；并分別于UVA照射前、后加入相關(guān)藥物進(jìn)行干預(yù)處理。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力；酶生化法測(cè)定胞漿中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性(GSH-px)、抗超氧陰離子自由基活力(A-SAC)、丙二醛(MDA)含量：熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白基因的表達(dá)。試驗(yàn)結(jié)果分析采用單因素方差分析法，應(yīng)用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，確定P<0.05作為

5、差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。主要研究結(jié)果如下：
　　1．EGCG對(duì)受UVA照射的成纖維細(xì)胞具有保護(hù)作用
　　UVA照射成纖維細(xì)胞后，細(xì)胞增殖受到明顯抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。但UVA照射前，以一定濃度的EGCG(40μg/mL以下)孵育2個(gè)小時(shí)，細(xì)胞的增殖活性明顯增加。
　　2．EGCG對(duì)受UVA照射的人皮膚成纖維細(xì)胞抗氧化活力的影響
　　UVA照射后，經(jīng)過(guò)EGCG孵育的人皮膚成纖維細(xì)胞GSH-Px活力和抗超氧陰離子活力明

6、顯高于未經(jīng)EGCG處理的細(xì)胞，但脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平則降低。這說(shuō)明，EGCG可以通過(guò)增加抗氧化酶的活性和減少脂質(zhì)的過(guò)氧化作用對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞起保護(hù)作用。
　　3．EGCG對(duì)受UVA照射人皮膚成纖維細(xì)胞膠原蛋白基因表達(dá)量的影響
　　UVA輻射抑制體外培養(yǎng)真皮成纖維細(xì)胞的膠原合成。真皮成纖維細(xì)胞受UVA照射后，Ⅰ型和Ⅲ型膠原基因的表達(dá)量顯著降低。若在接受UVA照射前細(xì)胞以一定濃度的EGCG孵育2小時(shí)，可顯著提高膠

7、原基因的表達(dá)水平。說(shuō)明EGCG可部分減輕UVA對(duì)Ⅰ型和Ⅲ型膠原基因表達(dá)的抑制作用，對(duì)皮膚的光老化有一定的保護(hù)作用。
　　4．EGCG對(duì)UVA照射人皮膚成纖維細(xì)胞VEGF基因表達(dá)量的影響
　　UVA照射成纖維細(xì)胞24h后，VEGF的表達(dá)顯著增高。顯示UVA輻射可刺激血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分泌，EGCG處理可以抑制UVA照射引起VEGF的過(guò)度表達(dá)。
　　本研究的的主要結(jié)論是：UVA可以劑量依賴的方式抑制人皮膚成纖維細(xì)胞增殖，EG