百草枯對肺成纖維細胞過氧化損傷影響及5-氨基水楊酸干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的:百草枯(PQ)是一種應(yīng)用于闊葉雜草控制的除草劑，又被稱為對草快、一掃光。包括我國在內(nèi)的140余個國家和地區(qū)得到廣泛應(yīng)用。近年來因自殺或者意外導(dǎo)致的百草枯中毒事件也呈逐年增加的趨勢。百草枯對機體造成的損傷作用涉及到多種病理機制，目前百草枯引起的過氧化損傷作用得到廣泛認同和重視。百草枯中毒因無特效解毒藥物，對百草枯治療策略均處在探索之中，抗氧化劑被認為是治療百草枯中毒具有良好的應(yīng)用前景的藥物。5-氨基水楊酸(5-ASA)是治療炎癥性腸

2、病的經(jīng)典藥物，具有良好的清除氧自由基、降低脂氧合酶活性、抑制前列腺素合成等作用。
　　本實驗研究通過測定WI-38VA13細胞內(nèi)超氧化物歧化酶抑制率及丙二醛、谷胱甘肽含量，探討百草枯濃度對WI-38VA13細胞的影響，進一步探討5-ASA對百草枯致急性肺損傷的保護機制。
　　方法:將購自美國ATCC公司的WI-38VA13細胞在含10％小牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中37℃，5％ CO2環(huán)境中培養(yǎng)，隔天換液，取對數(shù)生長期的

3、單層培養(yǎng)細胞，用0.25％胰蛋白酶對細胞進行消化，分離成單細胞懸液，進行正常傳代、培養(yǎng)。(1) MTT法分別測定不同PQ濃度、不同5-ASA濃度對WI-38VA13細胞生存率的影響，并選擇合適的PQ濃度、合適的5-ASA濃度。(2)將WI-38VA13細胞進行如下處理:將WI-38VA13細胞分為PQ0μmol/L組、PQ100μmol/L組、PQ200μmol/L組、PQ400μmol/L組、PQ600μmol/L組、PQ800μmo

4、l/L組，染毒后置于37℃，5％ CO2環(huán)境中培養(yǎng)24小時。另將WI-38VA13細胞經(jīng)過PQ200μmol/L染毒之后，將細胞分為5-ASA0mM干預(yù)組、5-ASA5mM干預(yù)組、5-ASA10mM干預(yù)組進行干預(yù)處理后置于37℃，5％ CO2環(huán)境中培養(yǎng)24小時。提取上述分組處理過后所得的細胞總蛋白。并分別測定各實驗組SOD抑制率以及MDA、GSH含量。所用數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±SD）表示，采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計，正態(tài)性檢驗后

5、做方差分析，方差齊的組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，方差不齊的組間比較采用多個獨立樣本的秩和檢驗。
　　結(jié)果:
　　1百草枯濃度對肺成纖維細胞存活率影響
　　各濃度組細胞存活率均有下降，其中200μmol/L至1000μmol/L劑量組與對照組相比，肺成纖維細胞存活率明顯低于對照組(P＜0.05)。
　　25-氨基水楊酸對肺成纖維細胞存活率影響
　　細胞在不同濃度5-ASA中培養(yǎng)24小時后發(fā)現(xiàn)20

6、Mm、30mM劑量組與對照組相比，WI-38VA13細胞存活率明顯低于對照組（P＜0.05）。
　　3百草枯濃度對肺成纖維細胞過氧化損傷影響
　　3.1百草枯濃度對肺成纖維細胞中SOD抑制率的影響
　　各濃度組SOD抑制率均有升高，其中PQ200μmol/L組、PQ400μmol/L組、PQ600μmol/L組、PQ800μmol/L組與PQ0μmol/L組相比，SOD抑制率明顯高于PQ0μmol/L組(P＜0.05)

7、。并隨PQ濃度的升高，SOD抑制作用更加明顯。
　　3.2百草枯濃度對肺成纖維細胞中MDA含量的影響
　　各濃度組MDA含量均有升高。其中PQ200μmol/L組、PQ400μmol/L組、PQ600μmol/L組、PQ800μmol/L組與PQ0μmol/L組相比，MDA含量明顯高于PQ0μmol/L(P＜0.05)。并隨PQ濃度的升高，MDA含量增加更加明顯。
　　3.3百草枯濃度對肺成纖維細胞中GSH含量的影響<

8、br>　　各濃度組GSH含量均有不同程度減低。其中PQ200μmol/L組、PQ400μmol/L組、PQ600μmol/L組、PQ800μmol/L組與PQ0μmol/L組相比，GSH含量明顯低于PQ0μmol/L(P＜0.05)。并隨PQ濃度的升高，GSH含量減少更加明顯。
　　4不同濃度5-氨基水楊酸對染毒后肺成纖維細胞干預(yù)作用的研究
　　4.1不同濃度5-氨基水楊酸干預(yù)對染毒后肺成纖維細胞中SOD抑制率的影響

9、　　各5-ASA不同濃度干預(yù)組SOD抑制率均有不同程度減低。其中5-ASA5mM干預(yù)組、5-ASA10mM干預(yù)組與5-ASA0mM干預(yù)組相比，SOD抑制率明顯低于5-ASA0mM干預(yù)組(P＜0.05)。其中5-ASA10mM干預(yù)組SOD抑制效果更加明顯(P＜0.05)。
　　4.2不同濃度5-氨基水楊酸干預(yù)對染毒后肺成纖維細胞中MDA含量的影響
　　5-ASA5mM干預(yù)組、5-ASA10mM干預(yù)組與5-ASA0mM干預(yù)組相比

10、，MDA含量明顯低于5-ASA0mM干預(yù)組(P＜0.05)。其中5-ASA10mM干預(yù)組MDA含量更低(P＜0.05)。
　　4.3不同濃度5-氨基水楊酸干預(yù)對染毒后肺成纖維細胞中GSH含量的影響
　　5-ASA5mM干預(yù)組、5-ASA10mM干預(yù)組與5-ASA0mM干預(yù)組相比，GSH含量明顯高于5-ASA0mM干預(yù)組(P＜0.05)。其中5-ASA10mM干預(yù)組GSH含量更高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　

11、1百草枯可引起肺成纖維細胞過氧化損傷。并隨著百草枯濃度升高，損傷越嚴重。
　　2過氧化損傷是百草枯所致急性肺損傷中一個重要的機制。表現(xiàn)為SOD抑制率增高，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的增多，抗氧化物質(zhì)GSH的減低。
　　3百草枯對肺成纖維細胞的氧化損傷程度，與百草枯的濃度呈正比關(guān)系，即百草枯濃度越高，肺成纖維細胞的氧化損傷程度越重。
　　4一定濃度的5-ASA具有抗氧化、減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的作用，對百草枯引起的急性肺損傷有保護