二氫楊梅素對UVA誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞光損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、皮膚作為人體與外界直接接觸的器官不僅會隨著年齡的增加發(fā)生自然老化，而且隨著全球環(huán)境問題的日益嚴(yán)峻，日光中紫外線對皮膚的損傷作用越來越顯著，光老化的進(jìn)程加快。因此對有效的光損傷保護(hù)劑的開發(fā)與利用將有助于人們的健康生活。藤茶中的二氫楊梅素（Dihydromyricetin,DHM)是有效的抗氧化劑，目前已見于眾多的保健品中。
　　目的：以長波紫外線(UVA)輻射永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)建立光損傷模型，在此基礎(chǔ)上給予DHM處理

2、，探討DHM對UVA輻射下的永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。
　　方法：為了構(gòu)建UVA輻射誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡模型，以MTT法和流式細(xì)胞Annexin V-PI染色法檢測細(xì)胞增殖活性和凋亡率，并通過Q-PCR檢測凋亡和炎性基因的表達(dá)水平。酶化學(xué)方法檢測谷光甘肽過氧化物酶（GSH-Px)的活性以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的水平，以二氯熒光黃雙乙酸鹽（DCFH-DA)為熒光探針，激光共聚焦檢測D

3、HM對UVA輻射后HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS生成的影響；JC-1染料檢測線粒體膜電位；激光共聚焦檢測p65的核定位；蛋白印跡法檢測(p)-JNK,（p)-p38，促凋亡蛋白Bax，Bid，抑凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xl和活化的caspase-3，caspase-9和PARP的表達(dá)。
　　結(jié)果：10J/cm2UVA照射HaCaT細(xì)胞后24h能夠引起50％細(xì)胞的凋亡，在照射后的8h促凋亡基因Bax表達(dá)顯著增加，炎性相關(guān)基因Cox-2，

4、IL-1β，IL-6在照射后的1h表達(dá)增加；1.25?10^M劑量范圍內(nèi)的DHM能抑制UVA誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞的凋亡，促凋亡基因Bax的表達(dá)以及炎性相關(guān)基因Cox-2，IL-1P，IL-6的表達(dá)以及ROS的生成，并能夠提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶GSH-Px的活性，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生，抑制UVA輻射所引起的HaCaT細(xì)胞線粒體膜電位的下降；同時1.25?10μM劑量范圍內(nèi)的DHM還能抑制HaCaT細(xì)胞內(nèi)p65的核轉(zhuǎn)運(yùn)，JNK的磷酸化以及促凋亡蛋白