二氫楊梅素對仔豬急性期反應(yīng)調(diào)控作用研究.pdf

1、本文旨在研究急性期反應(yīng)條件下，日糧中添加二氫楊梅素(APS)對仔豬機體代謝、炎性反應(yīng)、氧化還原狀態(tài)、肝臟線粒體功能的影響。本試驗通過LPS建立急性期反應(yīng)模型，從炎癥因子、急性期反應(yīng)蛋白(APPs)、氧化應(yīng)激三個方面，研究了APS對急性期反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。
　　第一，研究APS的體外抗氧化能力。本試驗主要目的是研究APS的體外抗氧化作用和對水溶性刺激劑2，2-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽(AAPH)引起紅細胞氧化損傷的保護作用。首

2、先是研究了APS對包括DPPH、ABTS、H2O2和O2-等在內(nèi)的不同自由基清除作用和APS的總抗氧化能力評價(FRAP)。其次，研究APS對由AAPH誘導(dǎo)豬紅細胞氧化應(yīng)激引起早期細胞凋亡的保護作用。研究結(jié)果表明，APS在不同濃度下均能清除DPPH、ABTS、H2O2和O2·-離子具有較強的抗氧化作用，清除率高于BHA和Trolox。在2-60μg/mL范圍內(nèi)APS的抗氧化能力與濃度呈依賴關(guān)系。另外，APS表現(xiàn)出對AAPH誘導(dǎo)的紅細胞氧

3、化應(yīng)激具有強大的抗氧化性能，能夠顯著抑制AAPH誘導(dǎo)的氧化溶血，脂質(zhì)過氧化，并抵抗紅細胞中SOD活性降低。APS抑制AAPH誘導(dǎo)紅細胞凋亡呈濃度和時間依賴性。
　　第二，.APS對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響。選用36頭健康的27±1日齡斷奶仔豬，分為3個處理組，每個處理組的日糧是分別在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加0 mg/kg（對照組）、100 mg/kg和400 mg/kg APS，試驗期28 d。結(jié)果表明，對照組及各APS組間仔豬的體增重

4、(BWG)和采食量(FI)沒有顯著差異(P＞0.05)，但日糧中添加APS能顯著降低仔豬的料重比(F/G)（P＜0.05）。
　　第三，APS對急性期反應(yīng)仔豬血液生化指標、激素水平及細胞因子的影響。本試驗中以LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬建立急性期反應(yīng)模型，研究APS對急性反應(yīng)仔豬的血清中細胞因子，肝臟功能敏感酶，血糖、血脂、蛋白質(zhì)及相關(guān)激素的變化的影響。24頭斷奶仔豬根據(jù)單因素因子試驗設(shè)計分為4組，即無應(yīng)激（腹膜注射等量生理鹽水）、LPS應(yīng)

5、激（腹膜注射25μg/kg·BW）、日糧中添加APS濃度100和400 mg/kg+LPS刺激組。試驗期28d。試驗結(jié)果表明:與注射生理鹽水組相比，LPS組仔豬血液炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α都顯著升高(P＜0.05);與LPS組相比，APS仔豬血液炎性因子顯著降低(P＜0.05)。LPS刺激后，血液中Glu、Leptin、PGE2顯著升高(P＜0.05)，Insulin、IGF-1顯著降低(P＜0.05)，GH無顯著變化;

6、相對于LPS刺激組，APS添加能顯著緩解急性期反應(yīng)導(dǎo)致的激素濃度變化(P＜0.05)。LPS可刺激仔豬血液中血糖、ALB濃度降低(P＞0.05)，NEFA、TG顯著升高(P＜0.05)，TP、TC、BUN無顯著變化(P＞0.05);APS能顯著降低LPS誘導(dǎo)的NEFA升高(P＜0.05);LPS刺激組中ALT、AST、ALP、LDH比生理鹽水對照組中顯著升高（P＜0.05），APS均能顯著降低LPS誘導(dǎo)的ALT、AST、ALP和LDH分

7、泌增加(P＜0.05)。
　　第四，APS對仔豬肝臟炎性反應(yīng)的影響。
　　(1)炎性細胞因子方面。與注射生理鹽水組相比，LPS組仔豬肝臟TLR2和TLR4基因表達水平顯著升高(P＜0.05)，IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2 mRNA表達水平升高（P＜0.05）。與LPS組相比，APS組顯著降低仔豬肝臟IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2 mRNA表達水平(P＜0.05)。LPS刺激肝臟p-Akt蛋白表達

8、量顯著升高(P＜0.05)，日糧中APS具有降低p-Akt蛋白表達的趨勢，但與LPS組和空白差異均不顯著（P＞0.05）。LPS刺激斷奶仔豬肝臟中NF-κB與DNA結(jié)合活性顯著升高(P＜0.05)。相對于LPS組，日糧中添加APS能顯著降低NF-κB與DNA結(jié)合活性(P＜0.05)，且400 mg/kg APS組與空白對照組無顯著差異。
　　(2)急性反應(yīng)蛋白方面。LPS引起急性反應(yīng)后，肝臟中能控制APPs合成的炎性因子IL-1β

9、、IL-6、TNF-α濃度顯著升高（P＜0.05），APS組中IL-1β、IL-6、TNF-α濃度顯著低于LPS刺激組(P＜0.05)。LPS刺激肝臟Cort濃度顯著升高(P＜0.05)，GRmRNA表達水平顯著降低（P＜0.05）;APS能夠顯著降低LPS引起的Cort濃度升高，增加肝臟GR mRNA表達水平，400 mg/kg APS組GR mRNA表達水平顯著高于生理鹽水對照組（P＜0.05）。LPS刺激后，仔豬肝臟中p-STAT

10、3蛋白表達量顯著升高(P＜0.05);相對于LPS組，日糧中添加APS能顯著(P＜0.05)降低p-STAT3蛋白表達量。LPS刺激后，仔豬肝臟中CRP和SAA2 mRNA表達濃度顯著升高(P＜0.05);與LPS組相比，400 mg/kg APS組能夠降低CRP和SAA2 mRNA(P＜0.05)。LPS刺激后，仔豬肝臟中AGP mRNA表達水平與對照組沒有顯著差異(P＞0.05);與LPS組相比，APS能夠增加AGP mRNA表達，

11、其中400 mg/kg APS組與對照組、LPS組均顯著差異(P＜0.05)。LPS刺激和APS添加對仔豬肝臟中AAT、CC3、CP mRNA表達水平無顯著影響（P＞0.05）。通過肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明日糧中添加APS可以減弱LPS誘導(dǎo)的肝損傷。
　　第五，APS對LPS誘導(dǎo)仔豬肝臟抗氧化功能的影響。
　　(1)APS對LPS誘導(dǎo)仔豬肝臟氧化還原狀態(tài)失衡的緩解作用。LPS刺激后，肝臟中抗氧化酶中GSH-Px、T-SOD

12、和CAT活性顯降低（P＜0.05）。與LPS組相比，400 mg/kgAPS組仔豬肝臟抗氧化酶T-SOD扣GSH-Px活性顯著升高(P＜0.05)。LPS刺激仔豬肝臟中MDA扣蛋白羰基含量顯著升高(P＜0.05);100和400 mg/kg APS組中MDA的含量比LPS組中低15.5％(P＞0.05)和31.7％（P＜0.05）。APS組中蛋白羰基含量與LPS組、對照組均沒有顯著差異（P＞0.05）。LPS刺激后，肝臟Ref-1和p-

13、Nrf2蛋白表達量顯著升高(P＜0.05)，400mg/kg APS組能顯著緩解LPS誘導(dǎo)的Ref-1和p-Nrf2蛋白表達量升高（P＜0.05）。LPS能顯著增加仔豬肝臟Nrf2下游HO-1、GST、PRX3、MCP-1 mRNA(P＜0.05)表達水平，APS組中上述基因的mRNA表達均呈下降趨勢，且400mg/kg APS組中PRX3、MCP-1與LPS組差異顯著(P＜0.05)。
　　(2)研究APS對仔豬肝臟線粒體氧化損

14、傷的保護作用。LPS引起急性反應(yīng)后，肝臟線粒體抗氧化酶Mn-SOD、GSH-Px和GRe的活性都顯著降低（P＜0.05），APS組均能顯著緩解LPS誘導(dǎo)線粒體抗氧化酶活性降低的影響（P＜0.05）。LPS刺激顯著升高線粒體中MDA、GSSG(P＜0.05)濃度，同時顯著降低GSH、GSH/GSSG濃度（P＜0.05）。400 mg/kg APS組仔豬肝臟線粒體比LPS組中MDA、GSSG分別低11.67％（P＜0.05）和36.36％(

15、P＜0.05)，GSH/GSSG高32.94％(P＜0.05)，GSH沒有顯著差異（P＞0.05）。LPS刺激后，線粒體中mtNOS活性和NO濃度顯著升高（P＜0.05），APS能顯著緩解LPS誘導(dǎo)的mtNOS升高(P＜0.05)和具有降低NO濃度的趨勢（P＞0.05）。LPS刺激后線粒體三羧酸循環(huán)酶SDH、MDH顯著降低（P＜0.05），APS均能顯著緩解LPS誘導(dǎo)SDH和MDH活性降低的影響（P＜0.05）。與注射生理鹽水組相比，L

16、PS能顯著降低仔豬肝臟線粒體ATP濃度，日糧中添加APS具有抑制ATP減少的趨勢，但與LPS組的結(jié)果差異不顯著(P＞0.05)。LPS刺激后能引起仔豬線粒體膜電位降低（P＜0.05），APS（400 mg/kg）組與LPS組相比能顯著增加線粒體膜電位(P＜0.05)，與正常組無顯著差異（P＞0.05）。LPS刺激后能顯著降低仔豬肝臟線粒體中Ca2+-ATP酶活性（P＜0.05），APS的添加具有抑制Ca2+-ATP酶活性降低的趨勢，但差

17、異不顯著(P＞0.05)。
　　綜合試驗結(jié)果表明:(1)二氫楊梅素具有強大的體外抗氧化活性。(2)日糧中添加APS一方面可以通過減弱Akt蛋白表達量，減少轉(zhuǎn)錄因子NF-κB與DNA結(jié)合，降低炎性因子基因表達水平，避免致炎/抗炎因子平衡被打破;另一方面通過抑制Cort和提高GR基因表達水平，減弱p-STAT3蛋白表達量，降低急性期反應(yīng)蛋白基因表達水平，從而緩解LPS誘導(dǎo)的急性期反應(yīng)。(3)APS通過保護抗氧化酶活性，提高細胞氧化還原