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文檔簡(jiǎn)介
1、【目的】
主要研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)對(duì)脂多糖(LPS)刺激的滋養(yǎng)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制。
【方法】
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為4組:(1)對(duì)照組,(2)LPS組:10μg/mlLPS作用24h(3)LPS+100nmol/LLXA4組:10μg/mlLPS+100nmol/LLXA4作用24h(4)LPS+200nmol/LLXA4組:10μg/mlLPS+200nmol/LLX
2、A4作用24h。以2,7二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)水平;細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)轉(zhuǎn)位變化;Western-blot檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞胞核、胞質(zhì)中Nrf2蛋白的表達(dá);RT-PCR檢測(cè)Nrf2下游抗氧化酶mRNA的表達(dá);黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)細(xì)胞上清SOD的含量;酶偶聯(lián)法檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX,GPX)的活力。<
3、br> 【結(jié)果】
1.ROS的檢測(cè):LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)DCF密度值為(77.00±5.83),與對(duì)照組(53.00±3.08)相比,LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯升高(P<0.01),使用100nmol/L、200nmol/LLXA4干預(yù)后,細(xì)胞內(nèi)ROS水平均明顯下降,DCF密度值分別下降至(62.00±3.39、55.00±4.30,P<0.01);
2.細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:LPS組Nrf2主要在
4、胞質(zhì)中表達(dá)。而加入LXA4干預(yù)后胞核可見較強(qiáng)的Nrf2的表達(dá);其中加入200nmol/LLXA4作用后胞核中的Nrf2的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01)。
3.Western-blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞胞核中Nrf2蛋白水平明顯下降(P<0.01),胞質(zhì)中Nrf2蛋白水平明顯上調(diào)(P<0.01),使用100nmol/L、200nmol/LLXA4干預(yù)后滋養(yǎng)細(xì)胞胞核中的Nrf2蛋白水平均上升(P<0.05、
5、P<0.01),胞質(zhì)中Nrf2蛋白水平均明顯下降(P<0.01)。
4.RT-PCR結(jié)果顯示:LPS組HO-1、SOD、GPXmRNA表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P<0.01),使用100nmol/LLXA4干預(yù)后HO-1、SOD、GPXmRNA表達(dá)水平均高于LPS組(P<0.05、P<0.01、P<0.01),而LPS+100nmol/LLXA4組與LPS+200nmol/LLXA4組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
6、
5.黃嘌呤氧化酶法結(jié)果顯示:LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞上清液中的SOD含量為(4.77±0.34)U/ml,與對(duì)照組(9.21±0.74)U/ml相比明顯下降(P<0.01),給予100nmol/L、200nmol/LLXA4干預(yù)后,均能明顯增加SOD含量,酶活力分別上升至(8.93±0.53、16.74±0.64)U/ml(P<0.01)。
6.酶偶聯(lián)法結(jié)果顯示:LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞裂解液中GPX含量為(8.65±0.
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