脂聯(lián)素修復(fù)雞骨骼肌細(xì)胞氧化損傷的分子機(jī)制研究.pdf

1、本研究通過構(gòu)建雞骨骼肌細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，探討脂聯(lián)素在p53、溶酶體、線粒體等的參與下，對(duì)肉雞骨骼肌細(xì)胞氧化損傷的修復(fù)機(jī)制，為肉雞抗應(yīng)激高效養(yǎng)殖提供依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1分離培養(yǎng)肉雞骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞并鑒定，過氧化氫處理構(gòu)建肉雞骨骼肌氧化應(yīng)激模型，分析氧化應(yīng)激和細(xì)胞活力相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果表明:(1)DESMIN免疫熒光鑒定培養(yǎng)獲得的細(xì)胞為骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞;(2)H2O2處理獲得的衛(wèi)星細(xì)胞，ROS、MDA含量水平和TUNEL染色細(xì)胞凋亡率

2、顯著升高，細(xì)胞活力、SOD和GSH-Px酶活力單位顯著降低(P＜0.05)，表明過氧化氫處理構(gòu)建的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞氧化應(yīng)激模型成功。
　　2脂聯(lián)素處理肉雞骨骼肌氧化應(yīng)激模型衛(wèi)星細(xì)胞，分析細(xì)胞內(nèi)溶酶體和線粒體指標(biāo)的變化。結(jié)果表明:(1)脂聯(lián)素處理組細(xì)胞ROS、MDA含量水平和凋亡率顯著降低，細(xì)胞活力、SOD和GSH-Px酶活力單位顯著升高(P＜0.05);(2)脂聯(lián)素處理組顯著改善溶酶體和線粒體的膜通透性，Bax、Cyt-c、Casp

3、ase8、Cathepsin B、Chymosin基因和蛋白水平均顯著降低，Bcl-2基因和蛋白水平顯著升高(P＜0.05)。表明脂聯(lián)素通過改善細(xì)胞溶酶體和線粒體功能來修復(fù)骨骼肌細(xì)胞的氧化損傷。
　　3p53抑制劑PFT-α與脂聯(lián)素共同處理氧化應(yīng)激模型細(xì)胞，研究p53參與脂聯(lián)素修復(fù)氧化應(yīng)激的機(jī)制。結(jié)果表明:與脂聯(lián)素處理氧化應(yīng)激模型組相比，(1)PFT-α進(jìn)一步顯著降低了細(xì)胞ROS、MDA含量水平和TUNEL凋亡率，促進(jìn)細(xì)胞活力、S

4、OD和GSH-Px酶活力提高(P＜0.05);(2)PFT-α改善溶酶體和線粒體的膜通透性，抑制Bax、Cyt-c、Caspase8、Cathepsin B、Chymosin基因和蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)Bcl-2基因和蛋白表達(dá)(P＜0.05)。抑制p53表達(dá)，可進(jìn)一步促進(jìn)脂聯(lián)素修復(fù)骨骼肌細(xì)胞氧化損傷的作用。
　　綜上所述，脂聯(lián)素可通過抑制p53的表達(dá)，改善細(xì)胞溶酶體和線粒體膜通透性、恢復(fù)膜電位、抑制凋亡基因和蛋白的表達(dá)、以及細(xì)胞凋亡進(jìn)