硫氧還蛋白對(duì)高氧肺損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文硫氧還蛋白對(duì)高氧肺損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究姓名：?jiǎn)稳鹌G申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)（新生兒）指導(dǎo)教師：常立文201105華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文10【關(guān)鍵詞】高氧；早產(chǎn)；凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶；硫氧還蛋白；肺損傷第二部分高氧對(duì)胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞硫氧還蛋白及其還原酶表達(dá)的影響【目的】研究高氧暴露對(duì)胎鼠肺泡二型上皮細(xì)胞(typeⅡalveolarepithelialcell，AECⅡ)硫氧還蛋白（thiedoxin，Tr

2、x）及其還原酶（thiedoxinreductase，TrxR）表達(dá)的影響及意義?！痉椒ā坎捎靡让负湍z原酶消化19d的胎鼠肺組織塊，按照差速離心和反復(fù)貼壁法，無(wú)菌分離、純化、原代培養(yǎng)胎鼠AECⅡ，待其生長(zhǎng)至亞融合狀態(tài)時(shí)，隨機(jī)分為空氣組和高氧組；于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置30min后，空氣組置于同一室內(nèi)空氣中，高氧組通10分鐘的850mLL以上純氧；然后密封培養(yǎng)瓶，置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。二組分別于培養(yǎng)12h、24h和48h時(shí)，倒置相差顯微鏡下觀察高

3、氧對(duì)細(xì)胞形態(tài)及活性的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞ROS變化及細(xì)胞凋亡情況；采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(reversetranionpolymerasechainreactionRTPCR)方法檢測(cè)二組各時(shí)間點(diǎn)Trx和TrxRmRNA，Trx1和TrxR1mRNA的表達(dá)；采用westernblot檢測(cè)胎鼠AECⅡ二組各時(shí)間點(diǎn)Trx及Trx1表達(dá)變化?！窘Y(jié)果】與空氣組比較，高氧暴露各時(shí)間點(diǎn)隨時(shí)間延長(zhǎng)AECⅡ細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)明顯不良，懸浮細(xì)胞增

4、多；高氧暴露各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)ROS生成及凋亡細(xì)胞明顯增加（P0.05）；westernblot結(jié)果顯示Trx和Trx1蛋白表達(dá)變化與mRNA有相同變化趨勢(shì)（P0.05）。【結(jié)論】高氧暴露使早產(chǎn)大鼠AECⅡ產(chǎn)生過(guò)量ROS從而導(dǎo)致AECⅡ細(xì)胞損傷和凋亡；高氧暴露可促使胎鼠AECⅡTrx及TrxR的mRNA表達(dá)上調(diào)；也可誘導(dǎo)Trx蛋白表達(dá)增加，提示Trx系統(tǒng)的表達(dá)上調(diào)對(duì)高氧誘導(dǎo)的肺泡二型上皮細(xì)胞損傷具有重要保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】高氧；肺泡Ⅱ型上皮