脂聯(lián)素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs)氧化應(yīng)激模型，探討脂聯(lián)素（adiponectin, APN）對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡的影響及可能通路。
　　方法：在含10％胎牛血清的低糖Dulbeceo’s Modified Essential Medium(DMEM)培養(yǎng)基中無菌培養(yǎng)HUVECs，選擇生長狀況良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組為：（1）對(duì)照組：不加干預(yù)因素；（2）過氧化氫（H2O2）組：培養(yǎng)基中加

2、入終濃度為200μmol/L的H2O2培養(yǎng)12小時(shí)誘導(dǎo)HUVECs氧化應(yīng)激模型；（3）脂聯(lián)素（APN）組：培養(yǎng)基中加入終濃度為100mg/L脂聯(lián)素與HUVECs共同孵育24小時(shí)；（4）脂聯(lián)素(APN)+過氧化氫（H2O2）組：培養(yǎng)基中加入終濃度為100mg/L脂聯(lián)素與HUVECs共同孵育24小時(shí)后，再加入終濃度為200μmol/L的H2O2培養(yǎng)12小時(shí)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激模型；(5)阿糖腺苷（AraA）+脂聯(lián)素（APN）+過氧化氫（H2O2）組

3、：培養(yǎng)基中加入終濃度為0.5mmol/LAraA孵育2小時(shí)后，再加入終濃度為100mg/L脂聯(lián)素與HUVECs共同孵育24小時(shí)，再加入終濃度為200μmol/L的H2O2培養(yǎng)12小時(shí)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激模型；(6)阿糖腺苷（AraA）+過氧化氫（H2O2）組:培養(yǎng)基中加入終濃度為0.5mmol/LAraA孵育2小時(shí)后，再加入終濃度為200μmol/L的H2O2培養(yǎng)12小時(shí)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激模型。之后檢測(cè)各組：（1）顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；（2

4、）采用Western blotting檢測(cè)pAMPK及AMPK蛋白的表達(dá)；（3）采用硫代巴比妥酸法檢測(cè)丙二醛（MDA)水平，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD)活力，采用二氯雙乙酸鹽熒光探針（DCFH-DA)檢測(cè)活性氧（ROS)水平；（4）采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：
　　1.顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)：正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞呈鋪路石樣鑲嵌生長；經(jīng)H2O2處理后細(xì)胞胞間連接消失，間隙變大；脂聯(lián)素能明顯減輕H2O

5、2導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)改變，而加用AMPK途徑抑制劑阿糖腺苷（AraA）后上述保護(hù)作用減弱。
　　2.pAMPK及AMPK蛋白的表達(dá)：與對(duì)照組比較，脂聯(lián)素預(yù)處理組中AMPK顯著被激活(P<0.05)；阿糖腺苷組（AraA）組AMPK顯著被抑制。
　　3.凋亡及氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)：與對(duì)照組相比，H2O2組細(xì)胞凋亡率顯著增加，氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS及MDA也顯著增加(P<0.05)，SOD降低(P<0.05)；與H2O2組相比，APN+

6、H2O2組可較大程度的逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，即細(xì)胞凋亡率顯著下降，氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS及MDA減少(P<0.05)，SOD增加(P<0.05)；與APN+H2O2組相比，AraA+APN+H2O2組保護(hù)作用明顯減弱,細(xì)胞凋亡率增加,氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS及MDA增高(P<0.05)、SOD減少(P<0.05)；但與H2O2組相比凋亡率降低，氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS及MDA水平減少，SOD水平增多。
　　結(jié)論：
　　1.H2O2能誘導(dǎo)人臍靜脈