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1、目的:研究脂氧素A4對(duì)高氧暴露下肺泡二型上皮細(xì)胞的保護(hù)作用,探討LXA4在高氧肺損傷中的作用及機(jī)制。
方法:AECII細(xì)胞原代培養(yǎng),并隨機(jī)分為Ⅰ:.空氣組(對(duì)照組)、Ⅱ:.高氧組、Ⅲ:.空氣+LXA4組、Ⅳ:.高氧+LXA4組。Ⅰ和Ⅲ組暴露于空氣中,Ⅱ和Ⅳ組暴露于95%的氧氣中,Ⅰ和Ⅱ組不加藥,Ⅲ和Ⅳ組給予LXA4干預(yù)。于暴露12h后在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及形態(tài)學(xué)變化;2',7'-二氯二氫熒光素二乙酯(DCFH-D
2、A)染色后熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平;并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1和NQO1mRNA的表達(dá)量;免疫熒光染色檢測(cè)Nrf2的核轉(zhuǎn)移情況。
結(jié)果:(1)空氣組和空氣+LXA4組細(xì)胞呈立方形或圓形島狀生長(zhǎng),貼壁好,細(xì)胞與細(xì)胞之間緊密連接,胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)較多顆粒(板層小體),幾乎無(wú)懸浮細(xì)胞.;高氧組暴露12h后,與空氣組、空氣+LXA4組比較細(xì)胞體積減小,細(xì)胞間隙明顯增大,胞內(nèi)顆粒數(shù)目減少,貼壁欠佳,可見(jiàn)大量懸浮
3、死細(xì)胞;高氧+LXA4組與高氧組比較,細(xì)胞排列較緊密,貼壁較好,懸浮細(xì)胞較少,與空氣組、空氣+LXA4組比較,細(xì)胞外形變化不大,細(xì)胞間隙稍增寬,可見(jiàn)少量懸浮細(xì)胞。
?。?)免疫熒光結(jié)果顯示,空氣組和空氣+LXA4組ROS熒光強(qiáng)度很弱,幾乎不可見(jiàn);高氧組暴露12h后,與空氣組、空氣+LXA4組比較,細(xì)胞內(nèi)ROS熒光強(qiáng)度明顯增加;高氧+LXA4組暴露12h后,與高氧組比較,ROS熒光強(qiáng)度明顯降低,但與空氣組、空氣+LXA4組比較,R
4、OS熒光強(qiáng)度仍有一定程度的增加。
?。?)免疫熒光結(jié)果顯示,空氣組和空氣+LXA4組Nrf2主要集中在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),無(wú)明顯核轉(zhuǎn)移;高氧組暴露12h后,與空氣組、空氣+LXA4組比較,Nrf2出現(xiàn)核轉(zhuǎn)移,在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)均可見(jiàn)表達(dá);高氧+LXA4組暴露12h后,與高氧組比較,Nrf2核轉(zhuǎn)移更明顯,與空氣組、空氣+LXA4組比較,Nrf2出現(xiàn)明顯核轉(zhuǎn)移,細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)均可見(jiàn)高表達(dá)。
?。?)高氧暴露12h后各組AECII細(xì)胞
5、Nrf2mRNA相對(duì)于空氣組的表達(dá)量分別為:空氣+LXA4組:1.011±0.052;高氧組:1.614±0.130;高氧+LXA4組:2.013±0.258??諝?LXA4組表達(dá)量與空氣組無(wú)明顯區(qū)別,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高氧組表達(dá)量較空氣組、空氣+LXA4組增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高氧+LXA4組表達(dá)量較高氧組、空氣組和空氣+LXA4組均明顯增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
(5
6、)高氧暴露12h后各組AECII細(xì)胞HO-1mRNA相對(duì)于空氣組的表達(dá)量分別為:空氣+LXA4組:1.067±0.081;高氧組:1.509±0.118;高氧+LXA4組:1.951±0.241??諝?LXA4組表達(dá)量與空氣組無(wú)明顯區(qū)別,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高氧組表達(dá)量較空氣組、空氣+LXA4組增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高氧+LXA4組表達(dá)量較高氧組、空氣組和空氣+LXA4組均明顯增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意
7、義(P<0.01)。
?。?)高氧暴露12h后各組AECII細(xì)胞NQO1mRNA相對(duì)于空氣組的表達(dá)量分別為:空氣+LXA4組:1.027±0.101;高氧組:1.519±0.153;高氧+LXA4組:1.944±0.244??諝?LXA4組表達(dá)量與空氣組無(wú)明顯區(qū)別,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高氧組表達(dá)量較空氣組、空氣+LXA4組增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高氧+LXA4組表達(dá)量較高氧組、空氣組和空氣+LX
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