猞猁三種組織成纖維細胞體外培養(yǎng)體系的建立及生物學特性分析.pdf

1、U D C論文題目研究生 道目娜指導教師 奎熳熬授奎疆副熬授專 業(yè) ．．． ．．動物堂． 一一研究方向 動物細胞王猩學 院 生僉抖堂堂隨二零一三年五月道日娜猞刪三種組織成纖維細胞體J ' l - 培養(yǎng)體系的建立及生物學特性分祈猞猁三種組織成纖維細胞體外培養(yǎng)體系的建立及生物學特性分析摘要為研究猞猁細胞體外培養(yǎng)體系及生物學特性，深入開展猞猁基因組學及瀕危野生動物保護工程，本研究獲取猞猁心臟、軀體、睪丸三種組織，采用組織塊培養(yǎng)法，用

2、- M E M 培養(yǎng)液進行原代、傳代培養(yǎng)，進行常規(guī)冷凍和復蘇，建立了猞猁三種組織成纖維細胞的體外培養(yǎng)體系，并對培養(yǎng)的細胞進行形態(tài)學觀察、生長曲線測定、微生物污染檢測、染色體核型分析、熒光蛋白質粒轉染表達等特性研究。結果顯示： 猞猁心臟、軀體及睪丸來源的組織塊分別在培養(yǎng)5 - - , 6 d 、8 - 9 d 、1 1 - 1 2 d 時開始有成纖維樣細胞從中長出。在進行傳代時，這3 種組織來源的細胞群體倍增時間均為4 0 h ，通常在4

3、 ～5 d 可鋪滿瓶底；對比細胞凍存前后存活率，細胞復蘇后活率較凍存前有所下降，但均有較高的存活率，都達到9 0 ％以上；三種組織細胞生長曲線均呈“S “ 型，符合體外培養(yǎng)細胞的生長規(guī)律，均經歷了潛伏期、指數生長期和停滯期；細菌、真菌、病毒、支原體等微生物污染檢測呈陰性；對猞猁5 0 個中期分裂細胞進行染色體數目統計，染色體數目為2 n = 3 8 ，為1 9 對，其中1 8 對為常染色體，1 對為性染色體。有約8 8 ％( 4 4 ／