多浪羊成纖維細(xì)胞庫(kù)的構(gòu)建及川陳皮素對(duì)其細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、為了進(jìn)一步的探索體細(xì)胞保存在物種遺傳資源保存中的應(yīng)用，本試驗(yàn)以我國(guó)地方品種多浪羊?yàn)檠芯繉?duì)象，采用組織塊貼壁培養(yǎng)方法建立了多浪羊成纖維細(xì)胞系，并根據(jù)美國(guó)ATCC的建系標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所建的細(xì)胞系進(jìn)行了生物學(xué)檢測(cè)，并繼續(xù)研究了川陳皮素對(duì)其多浪羊成纖維細(xì)胞凋亡的影響。研究結(jié)果如下： 1.多浪羊的樣本含量為40，細(xì)胞傳代次數(shù)為3代，凍存管數(shù)為103支，每支凍存管中的細(xì)胞數(shù)量為3.88×106個(gè)細(xì)胞/ml。 2.所培養(yǎng)的多浪羊細(xì)胞具有典型的

2、成纖維形態(tài)，絕大部分呈梭形或者不規(guī)則三角形。細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)呈火焰狀、旋渦狀或者放射狀走勢(shì)，在鏡想下觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)健康且形態(tài)良好。 3.多浪羊成纖維細(xì)胞復(fù)蘇后，其生長(zhǎng)曲線均呈“S”型，細(xì)胞經(jīng)歷了潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期及停滯期，符合細(xì)胞在體外生長(zhǎng)繁殖的一般規(guī)律。凍存前存活率為96.8％；復(fù)蘇后存活率為94.4％。 4.對(duì)所建多浪羊細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)菌、真菌及支原體等微生物檢測(cè)，結(jié)果均呈為陰性。 5.核型分析表明，多浪羊的二倍體染色

3、體數(shù)目2n=54，未見(jiàn)異常，染色體畸變率均低于3％，染色體結(jié)構(gòu)未有變異，表明所建多浪羊細(xì)胞系的細(xì)胞均為穩(wěn)定的二倍體細(xì)胞，在體外遺傳性能穩(wěn)定。 6.多浪羊細(xì)胞的LDH和MDH同工酶酶譜分析表明，呈現(xiàn)其獨(dú)特的條帶，LDH同工酶為5條：MDH同工酶為2條，具有著種屬特異性，可作為品種和物種分類的主要依據(jù)之一。細(xì)胞遺傳性能穩(wěn)定，表明未發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化及與其它物種細(xì)胞的交叉污染。 7.通過(guò)凋亡細(xì)胞形態(tài)觀察，細(xì)胞周期、細(xì)胞膜電位、細(xì)胞凋

4、亡率的檢測(cè)，結(jié)果表明：50mg/L、60 mg/L、70 mg/L、80 mg/L、90 mg/L的川陳皮素作用48h后，AO/EB染色并在光鏡下觀察，50mg/L、60 mg/L組細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變，70 mg/L、80 mg/L、90 mg/L組細(xì)胞出現(xiàn)明顯形態(tài)的改變、胞體變小、撕裂、皺縮等。大部分細(xì)胞很快的崩解、壞死，出現(xiàn)典型的凋亡特征。Annexin V/PI雙染法檢測(cè)到隨著川陳皮素濃度的增大而凋亡率明顯增高。羅丹明123結(jié)合流