通過線粒體DNA D-Loop區(qū)序列分析鑒別多結節(jié)性肝細胞性肝癌細胞克隆起源.pdf

1、目的：探討線粒體DNA(mtDNA)D-Loop區(qū)序列分析結合臨床病理因素判斷多結節(jié)性肝細胞性肝癌(肝癌HCC)細胞克隆起源的可行性。 方法：分組：實驗組為多結節(jié)肝癌組，來自廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院肝膽外科2004年4月至2007年8月連續(xù)收治的42例共112個結節(jié)HCC的根治性手術切除腫瘤組織；對照組來自同期單結節(jié)}tCC手術切除組織共20例40個樣本，分兩個亞組，對照組Ⅰ為16例單結節(jié)肝癌的2塊不相鄰的癌組織；對照組Ⅱ為4例

2、伴有肉眼門靜脈癌栓的肝癌患者，各取癌和癌栓1塊。正常對照組來自同期肝移植供肝或肝外傷切除組織共5例。用PCR結合直接測序的方法檢測各樣本組織mtDNA D-Loop區(qū)的序列，并分析各例癌結節(jié)中序列異同情況。同時對相關的臨床病理資料進行統(tǒng)計學處理。 結果：實驗組中有20例各結節(jié)的mtDNA D-Loop區(qū)序列存在差異，可能為多中心(MO)起源，22例各結節(jié)的。mtDNA D-Loop區(qū)序列完全相同，可能為單中心(即肝內轉移，IM)

3、起源；對照組20例中各樣本的mtDNAD-Loop區(qū)序列完全相同，為相同細胞克隆起源。HBeAg(P=0.008)、腫瘤大小(腫瘤直徑之和)(P=0.029)、腫瘤分布(位置)(P=0.041)、肝硬化(P=0.011)、門靜脈及鏡下癌栓(P=0.023)、主瘤的病理分化程度(Edmondson病理分級)(P=0.026)等是區(qū)分多結節(jié)性肝癌細胞克隆起源的重要指標；HBeAg(+)、腫瘤直徑之和≤7cm、腫瘤結節(jié)分別位于不同半肝、肝硬化

4、、門靜脈及鏡下無癌栓和/或主瘤的病理分化程度為高、中分化者，MO發(fā)生的機率高。MO組無瘤生存時間(20.7+4.5個月)明顯長于IM組的無瘤生存時間(6.3±1.3個月，P=0.022)；MO組生存時間(28.1±4.4個月)明顯長于IM組的生存時間(10.1±1.5個月，P=0.006)。在多因素分析中，IM/MO是無瘤生存時間(P=0.012)和生存時間(P=0.011)的獨立影響因素。 結論： 1.在多結節(jié)性肝癌發(fā)

5、生中，存在單中心性和多中心性兩種不同的起源方式。mtDNA D-Loop區(qū)序列具有較高的變異率，應用PCR結合直接測序的方法檢測該區(qū)序列并比較各個癌結節(jié)的DNA序列異同，可以快速、簡單、有效地為區(qū)分IM和MO起源提供參考。 2.HBeAg、腫瘤大小(腫瘤直徑之和)、腫瘤分布(位置)、肝硬化、門靜脈及鏡下癌栓、主瘤的病理分化程度等是協(xié)助鑒別IM和MO起源的重要指標；HBeAg(+)、腫瘤直徑之和≤7cm、腫瘤結節(jié)分別位于不同半肝、