小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)的血管細(xì)胞聯(lián)合種植在PLGA上初步構(gòu)建出血管組織.pdf

1、目的：在我們已有小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)且經(jīng)過RT-PCR和免疫組化鑒定血管平滑肌細(xì)胞(VSMc)和內(nèi)皮細(xì)胞(EC)種子細(xì)胞的基礎(chǔ)上，現(xiàn)在探索用誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞，聯(lián)合種植在經(jīng)明膠浸潤處理的聚丙交酯/乙交酯(PLGA)靜電紡絲材料上，進行體外構(gòu)建小管徑組織工程血管。 方法：①先將PLGA用1％明膠處理，并測量明膠浸潤處理前后PLGA的接觸角。②在明膠處理與否的PLGA片上種植血管平滑肌細(xì)胞，60分鐘后即用甲苯胺藍染色法觀察

2、材料對細(xì)胞的親和力：用MTT、掃描電鏡材料觀察經(jīng)培養(yǎng)1天，3天后細(xì)胞在材料上的生長情況。③在片狀PLGA材料一側(cè)隔日種植血管平滑肌細(xì)胞1次，3天共2次，再于另外一側(cè)種植內(nèi)皮細(xì)胞1次，并進行聯(lián)合培養(yǎng)2天后，作H&E和免疫組化檢查。④將聯(lián)合種植了血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的PLGA裹成直經(jīng)約1mm管狀包埋于4周齡的裸鼠皮下，分別于3天，1，3周取出進行HE染色和免疫組化檢查。⑤同時用放射免疫法測定單純種植1次血管平滑肌細(xì)胞的A組，單純種植內(nèi)皮

3、細(xì)胞的B組，聯(lián)合種植了平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞的c組這三組培養(yǎng)液中內(nèi)皮素含量。 結(jié)果：①處理前的接觸角是88.5°，處理后61.5°。②甲苯胺藍染色見血管平滑肌細(xì)胞在材料上密集、均勻分布：掃描電鏡觀察到1小時細(xì)胞開始延展，1天開始長入孔隙中，3天呈多層分布，無序狀生長；MTT檢測支架上細(xì)胞在3天內(nèi)的增殖情況等同于培養(yǎng)板。③H&E和免疫組化見材料兩側(cè)分別分布著血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮。④包埋3周后材料結(jié)構(gòu)仍存在，未被降解吸收。在材料周圍包裹結(jié)