應(yīng)用hisA基因分型和時間飛行質(zhì)譜快速鑒定伯克霍爾德菌群方法學(xué)比較研究.pdf

1、目的:
　　 應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix-assisted LaserDesorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF MS)蛋白提取法和hisA基因測序快速鑒定伯克霍爾德菌群，旨在建立快速準(zhǔn)確的鑒定方法。并對臨床分離的伯克霍爾德菌群進行分子分型。
　　 方法:
　　 收集117株臨床分離的伯克霍爾德菌群，

2、將菌種接種于哥倫比亞血平板和中國蘭平板，37℃孵育，挑取菌落采用MALDI-TOF MS蛋白提取法快速鑒定細(xì)菌;提取基因組DNA，采用hisA基因測序方法對其進行分子分群，同時以16S rRNA基因測序方法為標(biāo)準(zhǔn)，對兩方法進行比較。
　　 結(jié)果:
　　 hisA基因測序鑒定結(jié)果:94株新洋蔥伯克霍爾德菌(Burkhoderia cencepacia，GⅢ型)，11株多嗜伯克霍爾德菌（B.multivorans，GⅡ型），

3、9株洋蔥伯克霍爾德菌（B.cepacia，GⅠ型），3株越南伯克霍爾德茵（B.vietnamiensisGⅤ）。與hisA基因測序相比，16S rRNA基因測序結(jié)果9株洋蔥伯克霍爾德菌不能與穩(wěn)定伯克霍爾德菌（B.stabilis，GⅣ）區(qū)別，其余鑒定結(jié)果與其一致，符合率92.3％。MALDI-TOFMS鑒定分?jǐn)?shù)均值2.173，1株結(jié)果不可信（分值＜1.700），21株鑒定到屬(分值1.700-2.000)，29已鑒定至屬，有可能鑒定到種

4、（分值2.000-2.300），56株可以鑒定到種。117株洋蔥伯克霍爾德菌群MALDI-TOF MS蛋白提取法鑒定結(jié)果同hisA基因測序結(jié)果均符合，鑒定符合率100％。臨床菌株分離率新洋蔥伯克霍爾德菌（GⅢ型）占80.3％(94/117)，多嗜伯克霍爾德菌（GⅡ型）占9.4％，洋蔥伯克霍爾德菌(GⅠ型)占7.7％，越南伯克霍爾德菌（GⅤ型）占2.6％(3/117)。
　　 結(jié)論:
　　 1、使用Vitek2 compa

5、ct全自動細(xì)菌鑒定儀鑒定伯克霍爾德菌菌群時，不能有效將各種基因型分離開來，但其鑒定耗時較短。16s rRNA基因測序鑒定伯克霍爾德菌也只能區(qū)分一部分基因型，不能全部鑒定到種，并且這種方法花費3天左右才能完成。
　　 2，使用HisA基因測序的方法鑒定伯克霍爾德菌菌群時，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確。本實驗中，hisA基因測序的方法將伯克霍爾德菌菌群區(qū)分為四個基因型。但這種方法與16srRNA基因測序一樣花費時間較長。
　　 3，MALD