大鼠內(nèi)耳高增殖細(xì)胞的定量研究.pdf

1、目的：探討不同年齡及生長(zhǎng)因子對(duì)于大鼠內(nèi)耳高增殖細(xì)胞體外增殖的影響。
　　 方法：1.分離取出不同年齡即出生后1天(P1)，7天(P7)，14天(P14)，21天(P21)，30天(P30)，60天(P60)的SD大鼠各內(nèi)耳器官：橢圓囊斑，球囊斑和耳蝸Corti器，每個(gè)年齡段6只大鼠(12耳)，總計(jì)72只大鼠(144耳)，在無(wú)血清條件下進(jìn)行單細(xì)胞懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，至第七天，在倒置相差顯微鏡下對(duì)所形成的細(xì)胞球進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

2、學(xué)分析；同時(shí)描繪出同種器官不同年齡SD大鼠形成細(xì)胞球的數(shù)量變化曲線；2.分離取出60只(120耳)出生后1天SD大鼠各內(nèi)耳器官：橢圓囊斑，球囊斑和耳蝸Corti器，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組不添加任何生長(zhǎng)因子，選用上階段實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)組分別添加EGF，bFGF，IGF-1，LIF，進(jìn)行單細(xì)胞懸浮培養(yǎng)，至第八天，在倒置相差顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞球計(jì)數(shù)，對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；3.免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞球的表型特征。
　　 結(jié)果：1.

3、P1SD大鼠內(nèi)耳各個(gè)器官單細(xì)胞nestin表現(xiàn)為陽(yáng)性，培養(yǎng)7天后，可形成懸浮的細(xì)胞球，球體細(xì)胞免疫熒光表現(xiàn)為nestin和BrdU陽(yáng)性；2.(1)各個(gè)內(nèi)耳器官形成的細(xì)胞球數(shù)量：A.耳蝸Corti器：P1，P7大鼠單個(gè)Corti器可形成細(xì)胞球數(shù)分別為50±23個(gè)和33±15個(gè)，其差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而在P14、P21、P30、P60大鼠所取細(xì)胞在相同條件下培養(yǎng)，未能觀察到有細(xì)胞球形成；B.球囊斑：各個(gè)年齡段均觀察到有細(xì)

4、胞球形成，P1至P60單個(gè)球囊斑形成的細(xì)胞球數(shù)分別為23±9、21±8、16±6、14±4、13±3、12±3。P1與P7之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，P1與其他各年齡段間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；P7與P14間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，P7與P21、P30、P60間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；P14、P21、P30、P60互相之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。C.橢圓囊斑：各個(gè)年齡段均觀察到有細(xì)胞球形

5、成，P1至P60單個(gè)橢圓囊斑形成的細(xì)胞球數(shù)分別為29±10、24±9、21±6、18±4、15±4、14±5。P1與P7之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，P1與其他各年齡段間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；P7與P14、P21間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，P7與P30、P60之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；P14與P21間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，P14與P30、P60之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；P2

6、1、P30、P60互相之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)同年齡段單個(gè)不同內(nèi)耳器官所形成細(xì)胞球數(shù)之間的統(tǒng)計(jì)分析：①P1年齡段：耳蝸Corti器與球囊之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，耳蝸Corti器與橢圓囊之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，球囊與橢圓囊之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；P7年齡段：耳蝸Corti器與球囊之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，耳蝸Corti器與橢圓囊之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，

7、球囊與橢圓囊之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；②P14、P21、P30、P60年齡段：P21大鼠的球囊斑和橢圓囊斑之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，P14、P30、P60大鼠的球囊斑和橢圓囊斑之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.添加了生長(zhǎng)因子EGF、bFGF、IGF-1后，單個(gè)橢圓囊斑、球囊斑和耳蝸Corti器進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，所形成的細(xì)胞球數(shù)量明顯增多，與對(duì)照組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而三組之間無(wú)差異；添加LIF組則球團(tuán)

8、數(shù)量增多不明顯，與對(duì)照組比較提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：1.大鼠內(nèi)耳前庭器官(球囊斑，橢圓囊斑)以及耳蝸(Corti器)內(nèi)有高增殖能力細(xì)胞，能表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的特性；但隨著鼠齡的增長(zhǎng)，這種增殖能力總體趨勢(shì)表現(xiàn)為減退；2.與前庭器官比較，耳蝸內(nèi)高增殖細(xì)胞的增殖能力減退更快，但出生后1天的大鼠耳蝸內(nèi)高增殖細(xì)胞的增殖能力更強(qiáng)，出生后14天大鼠耳蝸內(nèi)未能發(fā)現(xiàn)高增殖細(xì)胞，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)。前庭器官內(nèi)高增殖細(xì)胞的增殖能力下降緩慢，持續(xù)至出生